LTP、GAFP基因轉(zhuǎn)化甘藍(lán)型油菜及其抗病性的研究.pdf

1、油菜是世界四大油料作物之一,其用途廣泛,經(jīng)濟(jì)價(jià)值高。在中國(guó),油菜菌核病(Sclerotinia sclerotiorum)居油菜三大病害之首,嚴(yán)重影響了我國(guó)的油菜生產(chǎn)。近年來(lái),隨著生物技術(shù)的發(fā)展,許多學(xué)者通過(guò)基因工程的手段研究油菜的抗病性。研究表明,植物脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白(Lipid Transfer Protein,LTP)、天麻抗真菌蛋白(Gastrodia Antifungal Protein,GAFP)具有廣譜抗病菌、真菌的活性。為研

2、究LTP、GAFP基因?qū)χ参锟共〉淖饔眉矮@得抗菌核病的油菜植株,本研究以甘藍(lán)型油菜(Brassica napus L.)為試驗(yàn)材料,將LTP和GAFP基因進(jìn)行農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化。主要工作和結(jié)果如下:
　　 1、LTP基因轉(zhuǎn)化甘藍(lán)型油菜
　　 (1)通過(guò)改變外植體的培養(yǎng)時(shí)間,菌液濃度,培養(yǎng)基的激素配比,培養(yǎng)條件等,優(yōu)化了油菜子葉柄遺傳轉(zhuǎn)化體系;
　　 (2)對(duì)T0代再生植株進(jìn)行PCR檢測(cè),得到陽(yáng)性植株12棵,自交

3、結(jié)實(shí)后收取T1代種子;T1代植株P(guān)CR檢測(cè)出陽(yáng)性條帶,說(shuō)明目的基因轉(zhuǎn)入;
　　 (3)通過(guò)苗期離體葉片菌核病菌絲體接種法,對(duì)T1代植株抗病性進(jìn)行鑒定,鑒定結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因T1代植株的抗病能力優(yōu)于對(duì)照“揚(yáng)油6號(hào)”;
　　 (4)草酸是核盤(pán)菌的次生代謝物,眾多研究證明油菜對(duì)草酸的抗性與對(duì)病原的抗性一致。種子萌發(fā)能力實(shí)驗(yàn)表明,草酸脅迫下轉(zhuǎn)基因T1代種子發(fā)芽率要明顯高于對(duì)照“揚(yáng)油6號(hào)”;
　　 (5)對(duì)轉(zhuǎn)基因T1代幼苗和對(duì)

4、照“揚(yáng)油6號(hào)”幼苗用草酸處理24h后,進(jìn)行生理指標(biāo)檢測(cè)。結(jié)果顯示,脅迫條件下轉(zhuǎn)基因T1代幼苗中MDA含量(與抗病能力負(fù)相關(guān))更低,SOD活性和POD活性(與抗病能力正相關(guān))更高。
　　 2、GAFP基因轉(zhuǎn)化甘藍(lán)型油菜
　　 (1)通過(guò)探討下胚軸誘導(dǎo)愈傷組織的影響因素,優(yōu)化油菜下胚軸轉(zhuǎn)化體系;
　　 (2)對(duì)T0代再生植株進(jìn)行PCR檢測(cè),得到陽(yáng)性植株10棵;
　　 (3)對(duì)T0代PCR檢測(cè)為陽(yáng)性的植株進(jìn)一步