甘藍型油菜brassicanapusl.tt8基因家族的克隆及反義轉(zhuǎn)化

1、西南大學(xué)碩士學(xué)位論文甘藍型油菜（Brassica napus L.）TT8基因家族的克隆及反義轉(zhuǎn)化姓名：謝伶俐申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：作物遺傳育種指導(dǎo)教師：殷家明;柴友榮20070501兩南大學(xué)碩十學(xué)位論文均存在典型的A A T A A A 力n 尾信號，在5 ’U T R 區(qū)都有富含A G 重復(fù)的微衛(wèi)星序列。核苷酸組成在不同區(qū)段變化較大，非編碼區(qū)G + C 含量明顯低于編碼區(qū)。B n T T 8 - 1 的內(nèi)含子的總長度比擬南芥大大縮

2、短。推導(dǎo)的B n ' I T 8 ．1 蛋白為5 2 1 個氨基酸，M w = 5 9 ．6 6 9 k D a ，p l = 5 ．6 1 ：B n T T 8 ．2 為1 個5 2 1 個氨基酸，M w = 5 9 ．9 5 5 k D a ，p l = 5 ．6 5 ；B n T F 8 ．3 為4 3 5 個氨基酸，M w = 5 0 ．0 7 1 k D a ，p l = 5 ．4 7 。3 個蛋白中均以谷氨酸的含量為

3、最高，且酸性氨基酸數(shù)目多于堿性的氨基酸。B n l T 8 - 3 I n I 淑A 對應(yīng)于其它T 1 “ 8 基因的終止密碼子發(fā)生突變，且與其它1 7 8m R N A 相比在該位置上游發(fā)生了一段1 0 7 b p的序列缺失，導(dǎo)致編碼的蛋白比其它T r 8 蛋白在C ．末端缺少8 6 個氨基酸。B n T T 8 ．1 、B n ' I ' T 8 ．2 和B n ' I ' T 8 ．3 之間在氨基酸

4、水平上有很高的同源性，B n I T 8 ．1 和B n ' I T 8 ．2的一致性和相似性分別為9 6 ．7 ％和9 8 ．1 ％，B n T T 8 ．1 和B n T F 8 ．3 的一致性和相似性分別為9 7 ％和9 8 ．6 ％，B n T T 8 ．2 和B n ' I T 8 ．3 的一致性和相似性分別為9 8 ．4 ％和9 9 ．3 ％。B n T T 8 基因的核酸及蛋白序列與已知植物的1 7 “ 8

5、 基因和b H L H 基因的核酸及蛋白序列有高度的同源性，尤- 與A t T T 8 最相似。B n T r 8 ．1 與A t T r 8 的相似性為8 3 ．4 ％，一致性為7 6 ．5 ％；B n T T 8 ．2 與A t T r 8 的相似性為8 3 ．9 ％，一致性為7 6 ．9 ％；B n I T 8 ．3 與A t T T 8 的相似性為8 3 ．9 ％，一致性為7 7 5 ％。B n T ' I K I 、B

6、 n T I ' 8 ．2 和B n ' I T 8 ．3 蛋白都在b 酯到H 4 1 7 區(qū)域分別對應(yīng)存在H I M 保守性結(jié)構(gòu)域，在該結(jié)構(gòu)域及保守性氨基酸位置，它們與A t ' I T 8 高度相似。它們分別有3 3 個、3 3 個和3 2 個潛在的磷酸化位點，說明磷酸化作用可能與它們的活性有關(guān)。它們的二級結(jié)構(gòu)主要由a 螺旋和隨機卷曲組成，延伸鏈和B 轉(zhuǎn)角也占一定比例。B n T T 8 家族3 個成員可能和

7、爿f Z 珊一樣，調(diào)控類黃酮途徑的結(jié)構(gòu)基因表達。由于B n ' I T 8 ．3 蛋白的C ．末端缺失了8 6 個氨基酸，所以該成員蛋白是否具有活性，活性強弱如何，值得進一步研究。2 、甘藍型油菜B n l T 8 基因家族的成員數(shù)S o u t h e r nb l o t 雜交結(jié)果中，每種限制酶均獲得3 條或3 條以下的雜交條帶。而本研究采用竭盡式R A C E 克隆方式，也只獲得了3 個成員的全長e D N A 。因此推測

8、，甘藍型油菜中B n I T 8 基因家族可能只存在3 個成員。3 、B n l T 8 反義表達載體的構(gòu)建將砌刀召基因家族共保守的8 1 7 b p 的片段反接到中間表達載體p C a m b i a 2 3 0 1 G 中，替換其上的G U S 基因，形成C a M V3 5 S 啟動子驅(qū)動、反義共抑制所有砌冊成員的植物表達載體，命名為p F B n ' I ' T 8 A 。4 、甘藍型油菜m 反義轉(zhuǎn)化植株的獲得采