豬鏈球菌2型一種可能的調(diào)控因子RfeA的鑒定及特性分析.pdf

1、豬鏈球菌（Streptococcus suis，SS）是一種重要的病原菌，可引起豬的腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎、肺炎、敗血癥等，根據(jù)莢膜抗原不同，豬鏈球菌可分為33個(gè)血清型（1～31,33，1/2型），其中2型(SS2)毒力最強(qiáng)、分布最廣，是一種重要的人畜共患病原，可導(dǎo)致人的死亡，嚴(yán)重危害養(yǎng)殖業(yè)和從業(yè)人員。目前已知的可能毒力因子包括溶菌酶釋放蛋白(MRP)，莢膜多糖(CPS)，胞外因子(EF)，溶菌素(SLY)，甘油醛-3-磷酸脫氫酶(G

2、APDH)等，只有CPS是已經(jīng)證實(shí)的毒力因子，其他的毒力因子以及致病機(jī)制仍不清楚，因此新的毒力相關(guān)因子有待發(fā)掘。
　　RfeA(RTX family exoproteinA gene)屬于RTX(Repeats in toxin family,RTX)家族，RTX是一種存在于許多細(xì)菌中的穿孔毒素，可以破壞宿主細(xì)胞膜，與細(xì)菌致病性相關(guān)。有報(bào)道稱rfeA可以作為SS2的保護(hù)性抗原，是一種位于SS2表面的分泌蛋白。本文通過對SS2強(qiáng)毒株

3、ZY05719和弱毒株T15的全基因組比對后，發(fā)現(xiàn)rfeA只存在于強(qiáng)毒的ZY05719中，通過PCR方法檢測rfeA在不同的44株豬鏈球菌菌株中的基因分布情況，發(fā)現(xiàn)絕大多數(shù)菌株(38/44)中包含有rfeA，其中在32株2型強(qiáng)毒株都具有該基因，因此推斷該基因在豬鏈球菌2型中分布廣泛。另外，通過對rfeA在ZY05719及其它豬鏈球菌基因組的生物信息學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)rfeA與epf-like位于同一操縱子上且與ef鄰近，它們之間有何關(guān)系，以及

4、其在豬鏈球菌中的致病機(jī)制中起何作用，值得進(jìn)一步研究。
　　為了研究rfeA的致病機(jī)制，利用同源重組構(gòu)建了rfeA的基因缺失株ΔrfeA，互補(bǔ)株CΔrfeA，并通過斑馬魚模型對缺失株、野生株和互補(bǔ)株的毒力進(jìn)行評估，結(jié)果發(fā)現(xiàn)缺失株毒力增強(qiáng)了，互補(bǔ)株的毒力基本回復(fù)到野生水平，但是三者基本生物學(xué)性狀，如菌落形態(tài)特征、生長快慢等無明顯改變。
　　為了進(jìn)一步研究其毒力增強(qiáng)的致病機(jī)制，通過Real-time PCR對各菌株中mrp，ef，