苦地膽內(nèi)酯對嗜水氣單胞菌感染斑馬魚的保護(hù)效果及其機(jī)理初探.pdf

1、苦地膽(Elephantopus scaber Linn.)是一種分布廣泛、來源豐富的民間常用傳統(tǒng)中草藥。苦地膽內(nèi)酯(E.scaber lactones，ESL)作為苦地膽的重要活性成分，對大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、腸炎沙門氏菌、巴氏桿菌、蠟狀芽孢桿菌等具有明顯的體外抗菌作用；對供試細(xì)菌的體外抗菌作用機(jī)理主要是在細(xì)菌的對數(shù)生長期，破壞細(xì)菌細(xì)胞壁，改變細(xì)胞膜通透性，導(dǎo)致細(xì)胞組分喪失、蛋白質(zhì)變性，釋放出溶菌酶引起細(xì)菌自溶。然而，ESL是

2、否對動物特別是水生動物的重要病原菌-嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila，AH)具有體內(nèi)抗感染效果，其抗感染機(jī)理如何，尚未見報(bào)道。本研究采集苦地膽，利用超聲波輔助提取、加壓硅膠柱層析等技術(shù)制備ESL，利用模式實(shí)驗(yàn)動物斑馬魚(Danio rerio)，進(jìn)行ESL體內(nèi)抗AH菌感染保護(hù)效果試驗(yàn)，并初步探索ESL體內(nèi)抗感染的機(jī)理，以補(bǔ)充ESL體內(nèi)抗感染研究的內(nèi)容，為ESL成為中草藥來源的抗菌飼料添加劑奠定理論與試驗(yàn)基礎(chǔ)。主要研

3、究結(jié)果如下：
　　1.采用超聲波輔助提取、加壓硅膠柱層析等技術(shù)能夠制備到苦地膽種內(nèi)酯、異苦地膽種內(nèi)酯和去氧苦地膽內(nèi)酯，以石油醚：氯仿：乙醚(3:5:2)為展開劑，薄層層析法(thin layer chromatography，TLC)法測得三者Rf值分別為0.364、0.316和0.161。
　　2.ESL對AH菌有顯著的體外抑菌作用，對AH菌的MIC、MBC分別為12.5mg/ml、15.6mg/ml。
　　3.飼料

4、中添加一定劑量的ESL能對AH菌感染斑馬魚形成保護(hù)作用，高劑量ESL組(0.8％、1.6％)保護(hù)效果顯著優(yōu)于低劑量ESL組(0.2％、0.4％)，與0.1％恩諾沙星的保護(hù)效果相當(dāng)。
　　4.投喂ESL含量為0.8％和1.6％的飼料，能使斑馬魚在AH菌致病性胞外產(chǎn)物溶液中存活時間顯著高于對照組，說明高劑量的ESL能增強(qiáng)斑馬魚抗AH菌致病性胞外產(chǎn)物的能力。
　　5.飼料中添加不同劑量的ESL對斑馬魚的頭腎指數(shù)及脾臟指數(shù)沒有影響。

5、
　　6.飼料中添加0.8％和1.6％的ESL能夠顯著提高斑馬魚體表黏液、肝臟及鰓中溶菌酶的活性；添加0.4％的ESL能顯著提高斑馬魚體表黏液中溶菌酶的活性。
　　7.飼料中添加0.8％、1.6％的ESL能夠顯著提高斑馬魚肝臟堿性磷酸酶活性。
　　8.飼料中添加1.6％的ESL能夠顯著提高斑馬魚鰓總超氧化物歧化酶活性。
　　9.飼料中添加0.8％的ESL能夠顯著提高斑馬魚鰓組織中IgM含量。
　　10.ES