口蹄疫O型病毒3A和3B基因對病毒宿主嗜性的影響.pdf

1、口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus，FMDV)非結構蛋白3A基因的突變（點突變或缺失）和3B基因的拷貝數與病毒的宿主嗜性有關，但FMDV宿主偏嗜性的分子機制目前還不明了。
　　本研究選取口蹄疫Mya-98譜系牛源分離株O/GZSB/2011和豬源分離株O/GD/2/CHN/2010，進行了全基因組測序和全長感染性cDNA克隆的構建，并在此基礎上構建了3A缺失突變體（rvSBΔ93-102、rvSB

2、Δ133-143、rvGDΔ93-102和rvGDΔ133-143）、3A嵌合病毒(rvSB70、rvOZ70和rvSBqO)、3A標記病毒(rvSBm、 rvSBh和rvSBf)和3B突變體病毒(rvB1323、rv2B3、rvB13和rv1B3)，分析了這些重組病毒在不同宿主細胞上的生物學特性，結果表明:
　　1、4株3A缺失突變體在BHK-21、PK-15和胎豬腎原代細胞(FPK)上具有與親本毒株相似的蝕斑表型和生長動力學;

3、在胎牛腎原代細胞(FBK)上，rvSBΔ133-143和rvGDΔ133-143具有與其親本毒株相似的蝕斑表型和生長動力學，而rvSBΔ93-102和rvGDΔ93-102能夠復制，但是展示較小的蝕斑表型和較低的復制能力。因此，3A蛋白上的93-102位氨基酸殘基的缺失顯著影響病毒在FBK上復制能力，說明他是影響宿主嗜性的主要因素之一;然而，該位點缺失并不能完全消除病毒在FBK細胞上的復制能力，說明除3A蛋白93-102位氨基酸外，FM

4、DV基因組中的其他序列也影響FMDV的宿主嗜性。
　　2、3A嵌合病毒及其親本病毒在BHK-21和FPK細胞上具有相似的蝕斑表型和生長動力學;而rvSBqO和rvSB70與其親本毒株相比，在FBK細胞上呈現較小的噬斑表型和較低的生長速率，rvOZ70和O/HN/CHA/93在FBK細胞上不能形成可見的蝕斑。據此得出:3A蛋白上93-102位氨基酸兩側的序列也影響FMDV的宿主嗜性;在FMDV基因組中，3A蛋白以外的其他序列也影響F

5、MDV的宿主嗜性。
　　3、標簽蛋白可在3A標記病毒的傳代中穩(wěn)定遺傳和表達，并且3A標記病毒與親本病毒在BHK-21細胞上具有相似的蝕斑表型和生長動力學;而3A標記病毒在FBK細胞上呈現比其親本毒株較小的噬斑表型和較低的生長速率，然而3個3A標記病毒在FBK細胞上展示相似的蝕斑表型和生長動力學。此結果說明，FMDV3A蛋白上93-102位氨基酸的替換影響FMDV在FBK細胞上生長速率，并且3A蛋白上影響FMDV宿主嗜性的93-10

6、2位氨基酸殘基可縮短為94-101位氨基酸殘基。
　　4、3B突變體病毒rv2B3、rvB13和rvB1323在BHK-21和FBK具有與親本毒株相似的蝕斑表型和生長動力學，而含1個拷貝的rv1B3病毒在BHK-21和FBK細胞上則展示較小的蝕斑表型和較低的復制速率。在同等劑量接種條件下，3B突變體病毒在BHK-21細胞上的病毒滴度與其各自在FBK細胞上的病毒滴度相似，但3B突變體病毒在BHK-21和FBK細胞上的病毒滴度從高到低