八種禽類病毒基因芯片檢測技術初步研究.pdf

1、家禽養(yǎng)殖是我國畜牧業(yè)的重要支柱，隨著養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，各種禽類疾病特別是傳染性的病毒疾病不斷出現(xiàn)，嚴重的困擾著我國家禽養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。新城疫、禽流感、禽傳染性支氣管炎、禽傳染性法氏囊病、禽白血病、馬立克氏病、禽痘以及減蛋綜合癥是禽養(yǎng)殖業(yè)中八種重要的病毒性疾病。建立這八種病毒的檢測技術，來加強對這些病毒引起的禽病的流行動態(tài)及分布研究，對于有效的預防這些病毒性疾病，促進家禽養(yǎng)殖的健康發(fā)展，減少其經濟損失具有極為重要的意義。
　　

2、DNA微陣列是上世紀90年代出現(xiàn)的一種基于核酸雜交的檢測技術，具有具有高通量，快速，微量化，平行化等其他技術無法比擬的特點，被廣泛的應用于致病微生物的快速診斷上。本論文希望針對這八種禽類病毒建立DNA微陣列檢測技術，為禽病的防治和診斷提供有效手段和技術措施。
　　 本論文首先根據(jù)馬立克氏病毒、禽痘病毒以及減蛋綜合癥病毒這三種DNA病毒的基因保守序列，設計引物，PCR擴增三種病毒基因保守片段并克隆后，將單酶切產物作為捕捉探針。將捕

3、捉探針以高溫烘烤結合紫外交聯(lián)的方式固定在尼龍膜上。再通過多重PCR摻入Cy5-dCTP對待檢標本中三種DNA病毒進行標記。與固定在尼龍膜上的捕捉探針進行雜交。雜交完畢后再用Odyssey近紅外成像系統(tǒng)中檢測結果。結果表明三種病毒檢測靈敏度在104拷貝至105拷貝之間。該方法不僅可以對單一病毒進行檢測，而且對兩種病毒或三種病毒混合感染也能同步進行檢測。
　　 再根據(jù)新城疫病毒、禽流感病毒、禽傳染性支氣管炎病毒、禽傳染性法氏囊病毒、