稻瘟病菌中MoRab51假定互作蛋白MoYIP3、MoVPS9的功能分析.pdf

1、Rab蛋白是一類單體形式的GTPase，由200多個(gè)氨基酸組成，具有共同的結(jié)構(gòu)特征，包括保守的G結(jié)構(gòu)域與高度可變的N端和C端并且有類似于Ras蛋白的重疊結(jié)構(gòu)，Rab蛋白作為細(xì)胞內(nèi)囊泡運(yùn)輸?shù)姆肿娱_關(guān)，在囊泡運(yùn)輸過程的不同階段發(fā)揮作用。Rab5是Rab家族蛋白中的一員，它主要定位在早期內(nèi)涵體上，調(diào)控早期內(nèi)涵體的出芽、融合、囊泡的形成以及受體介導(dǎo)的胞吞過程參與胞內(nèi)蛋白質(zhì)等物質(zhì)的定向運(yùn)輸。
　　本論文是在前期已經(jīng)明確MoRab51功能的基

2、礎(chǔ)上，重點(diǎn)尋找其下游調(diào)控侵染致病過程的效應(yīng)因子并進(jìn)行功能研究。因此，我們通過生物信息學(xué)分析，在稻瘟病菌中獲得MoRab51的兩個(gè)假定互作蛋白MoYIP3和MoVPS9，通過酵母雙雜交點(diǎn)對點(diǎn)的方法鑒定它們之間的互作關(guān)系；通過同源重組的方法敲除基因并進(jìn)行后續(xù)基因功能分析，從而初步明確兩個(gè)蛋白在稻瘟病菌中的功能。
　　酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)表明，MoYIP3不與MoRab51互作，而MoVPS9則與DN狀態(tài)下的MoRab51互作，初步驗(yàn)證MoV

3、PS9是MoRab51的GEF（guanine nucleotide exchange factors）。
　　通過生物信息學(xué)的方法，對兩種蛋白進(jìn)行了亞細(xì)胞定位，并比較其與真菌中同源蛋白的進(jìn)化關(guān)系，結(jié)果顯示，其對應(yīng)的結(jié)構(gòu)域高度同源。通過同源重組的方法，獲得了MoYIP3和MoVPS9基因的敲除突變體，對基因功能做了相應(yīng)的表型分析。結(jié)果表明，與野生型ku80相比，△MoYIP3突變體的氣生菌絲減少、菌落邊緣厚度變薄，產(chǎn)孢量下降，但致

4、病性沒有降低，說明基因MoYIP3的缺失不會對稻瘟病菌的生長發(fā)育及致病機(jī)制產(chǎn)生關(guān)鍵性的影響，但該基因在稻瘟菌菌絲形成及產(chǎn)孢途徑中發(fā)揮其作用?！鱉oVPS9突變體菌落生長速率明顯減慢、氣生菌絲減少、菌落邊緣厚度變薄、孢子梗數(shù)目減少、產(chǎn)孢量顯著下降。同時(shí)，突變體對外界脅迫的敏感性增強(qiáng)，致病性顯著降低，說明基因MoVPS9的缺失對稻瘟菌的生長發(fā)育及致病性產(chǎn)生重要的影響。
　　Real-timePCR分析結(jié)果表明，MoRab51在MoYI