BoLA-I外顯子2、3在親本和子代奶牛中同源性研究.pdf

1、奶牛在人們?nèi)粘Ｉ钪邪缪葜絹?lái)越重要的作用，而奶牛繁殖力低下一直是制約奶牛產(chǎn)業(yè)發(fā)展的一個(gè)瓶頸。哺乳動(dòng)物和人類的妊娠過(guò)程是自然界中存在的同種半異體移植免疫耐受的天然模型。
　　 主要組織相容性復(fù)合體(major histocompatibility complex，MHC)在妊娠維持中起著重要的作用。牛的MHC又稱為牛白細(xì)胞抗原(Bovine leucocyte antigen，BoLA)，其基因位于第23號(hào)染色體上。按照MHC異

2、源性解釋，雙親BoLA-Ia基因越相似，妊娠排斥越小，而B(niǎo)oLA-Ia又具有高度的多態(tài)性。相反地，BoLA-Ib的表達(dá)有利于保護(hù)胚胎免受母體免疫侵害，但多態(tài)性不高。按照這一推理，BoLA-Ib在胎兒和母體的差異越小或表達(dá)水平越低，排斥得越嚴(yán)重。
　　 根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)得出的部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選取與妊娠相關(guān)的一個(gè)BoLA-Ia基因(BoLA-A)和一個(gè)BoLA-Ib基因(BoLA-NC1)，根據(jù)MHC異源性引起妊娠排斥的相關(guān)理論，取正

3、常妊娠母牛PBMC、配種公牛精液和胎兒體細(xì)胞，從中提取DNA，設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增相應(yīng)的BoLA-I相關(guān)基因，比較這兩個(gè)基因的外顯子2、3在六組樣本里父本、母本和子代中的同源性，確定其同源性規(guī)律，從而進(jìn)一步推出其同源性與正常妊娠維持的關(guān)系，并探討其對(duì)妊娠的可能性影響。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，父本、母本、子代同源性差異普遍存在，且與NCBI上公布的相對(duì)應(yīng)的BoLA序列并不完全一致，可見(jiàn)BoLA多態(tài)性明顯，而且其多態(tài)性不僅存在于種間，還存在于

4、種內(nèi)。從親本與子代同源性數(shù)據(jù)我們可以看出，BoLA-A基因和BoLA-NC1基因更多的是遺傳于父本(58.33%和55.56%)，可見(jiàn)父本這兩個(gè)基因?qū)ψ哟挠绊懥Ω?。本?shí)驗(yàn)樣本為正常妊娠的母牛和正常生產(chǎn)的仔牛，雖然其在外顯子2、3上存在一些序列差異，但兩個(gè)基因的差異都比較小，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測(cè)，要維持正常妊娠，BoLA-A親本外顯子2同源性應(yīng)大于99.75%，外顯子3同源性應(yīng)大于99.69%；BoLA-NC1親本外顯子2同源性應(yīng)小于99

5、.57%，外顯子3同源性應(yīng)小于98.73%，但是由于缺乏由親本同源性差異而引起的非正常妊娠樣本，我們無(wú)法推測(cè)BoLA-I親本同源性閾值。
　　 在同一樣本組中，BoLA-A與BoLA-NC1的同源性大小有一定差異，但是這種差異并不明顯(P>0.05)。本研究六組樣本中外顯子2、3與NCBI上序列信息對(duì)比分析，發(fā)現(xiàn)均存在單核苷酸突變，發(fā)現(xiàn)了BoLA-A外顯子2上有4個(gè)突變位點(diǎn)，外顯子3上有4個(gè)突變位點(diǎn)；BoLA-NC1外顯子2上有

6、10個(gè)突變位點(diǎn)，外顯子3上有11個(gè)突變位點(diǎn)。這些突變位點(diǎn)有一部分為同義突變，但大部分都造成了編碼的氨基酸的改變，而且在同組不同樣本中存在相同的突變位點(diǎn)，但是因?yàn)闃颖緮?shù)量有限，以上并不能全面概括BoLA在外顯子2、3上的SNPs。
　　 本研究比較了BoLA-A和BoLA-NC1基因在六組樣本中親本和子代中的同源性，其差異性普遍存在，而且父本這兩個(gè)基因?qū)ψ哟挠绊懥Ω?；并根?jù)結(jié)果推測(cè)出要維持正常妊娠，這兩個(gè)基因的同源性范圍；另外