LMW-GS基因Ee34轉(zhuǎn)化小麥及SRL-TRQ型ω-醇溶蛋白基因的克隆研究.pdf

1、長穗偃麥草是改良栽培小麥最為重要的野生資源之一，已有的實驗證明在該材料中含有促進小麥面粉品質(zhì)特性的潛在的優(yōu)質(zhì)谷醇溶蛋白基因。其中，低分子量谷蛋白亞基基因Ee34含有7個半胱氨酸殘基，體外的面團實驗證明在加入該亞基后面團優(yōu)質(zhì)相關特性顯著提高(Chenetal.2010)。在此基礎上，構建了Ee34的真核表達載體，通過農(nóng)桿菌介導的莖尖轉(zhuǎn)化技術轉(zhuǎn)化小麥主栽品種Jimai21，經(jīng)分子鑒定和遺傳分析后獲得了轉(zhuǎn)基因陽性株系;利用SDS-PAGE分析

2、了轉(zhuǎn)基因小麥的種子，結(jié)果發(fā)現(xiàn)部分轉(zhuǎn)基因株系有特異蛋白大量表達;同時設計了針對低分子量谷蛋白基因Ee34的基因特異分子標記。以上結(jié)果將推進小麥品質(zhì)育種的理論和應用研究。
　　 小麥醇溶蛋白是胚乳中的主要儲藏蛋白，賦予面團延展性。目前，在普通小麥中，已經(jīng)有大量的α/β-、γ-醇溶蛋白基因被克隆，但是關于ω-醇溶蛋白基因的克隆報道還較少，尤其是SRL-/TRQ-型ω-醇溶蛋白基因。根據(jù)現(xiàn)有的SRL-/TRQ-型ω-醇溶蛋白基因的全基因

3、和EST序列設計了一對兼并引物，以體細胞雜種漸滲系Ⅱ-12及其親本JN177和長穗偃麥草的基因組DNA為模板，擴增ω-醇溶蛋白基因。結(jié)果顯示，僅從長穗偃麥草中鑒定了7個ω-醇溶蛋白基因，長度變化在837bp～951bp，而在Ⅱ-12及其親本JN177中沒有獲得全長序列。其中3個為SRL-型ω-醇溶蛋白基因，3個為TRQ-型ω-醇溶蛋白基因，另外1個TRQ-型ω-醇溶蛋白基因含有重復信號肽區(qū)域。推導的氨基酸序列發(fā)現(xiàn)這些ω-醇溶蛋白由兩側(cè)短