版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、Ror2(The receptor tyrosine kinase-like orphan receptor)是RTKs家族中的一員,為單次跨膜受體,在人類的骨骼發(fā)育和癌癥發(fā)生中發(fā)揮了十分重要的作用。在哺乳動(dòng)物例如小鼠中,Ror2突變體小鼠呈面部畸形,四肢和尾部短小,呼吸系統(tǒng)功能障礙,最終導(dǎo)致新生小鼠致死。在爪蛙中的研究發(fā)現(xiàn),XRor2及其突變體干擾了原腸期的匯聚延伸運(yùn)動(dòng)。因此,Ror2在早期胚胎發(fā)育過程中可能發(fā)揮了重要作用,所以我們利
2、用斑馬魚胚胎體外發(fā)育及早期透明等優(yōu)勢,對Ror2在早期胚胎發(fā)育中的功能進(jìn)行深入研究。前人研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn),Ror2在小鼠和爪蛙中作為一類非Frizzled受體,能夠與Wnt5a相互作用調(diào)節(jié)CE運(yùn)動(dòng)。
匯聚延伸(CE)運(yùn)動(dòng)是原腸胚期的一種重要的細(xì)胞運(yùn)動(dòng)形式,在脊椎動(dòng)物早期胚胎發(fā)育過程中發(fā)揮了十分重要的作用。值得注意的是,多種遺傳學(xué)證據(jù)強(qiáng)調(diào)了在斑馬魚胚胎原腸胚期調(diào)節(jié)CE運(yùn)動(dòng)的重要性。雖然Ror2在小鼠和爪蛙中能夠與Wnt5a相互作用調(diào)
3、節(jié)CE運(yùn)動(dòng),然而斑馬魚中,Wnt5a在原腸胚時(shí)期的表達(dá)量很低,而且Wnt5a敲降后也沒有引起CE缺陷的表型。然而斑馬魚中Wntll的突變體slb顯示了缺陷的CE運(yùn)動(dòng),之前的研究發(fā)現(xiàn),斑馬魚Wntll能夠與Frizzled-7和Flamingo相互作用調(diào)節(jié)細(xì)胞運(yùn)動(dòng),那么斑馬魚中Wntll是否能通過Ror2發(fā)揮功能呢?Hiroki Hikasa等研究表明XRor2與XWntll,Xfz7的共過表達(dá)能夠協(xié)同抑制匯聚延伸運(yùn)動(dòng)。生化實(shí)驗(yàn)表明,XR
4、or2的胞外結(jié)構(gòu)域CRD能夠與XWntll相結(jié)合,這一研究結(jié)果為我們提供了一些信息,但是并未有研究報(bào)道Wntll和Ror2體內(nèi)的相互作用功能。因此,以上的論述使我們提出了一些疑問,在斑馬魚中Ror2是否能夠在CE運(yùn)動(dòng)中發(fā)揮功能?Wntll對CE運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)作用是否是通過Ror2的介導(dǎo)?Ror2與Wntll是否能夠相互結(jié)合?這些問題目前還沒有得到解答。本研究的目的就是對上述疑問依次進(jìn)行探討。
我們首先克隆得到了斑馬魚的Ror2基因
5、,通過序列比對發(fā)現(xiàn)斑馬魚Ror2與人、小鼠和爪蛙的Ror2同源性極高。通過RT-PCR分析顯示,Ror2為母源性基因,且隨后的各胚胎時(shí)期均有表達(dá),并且值得一提的是,Ror2在6-9hpf表達(dá)量較高,這暗示著Ror2有可能在原腸胚期發(fā)揮作用。Ror2的過表達(dá)抑制了胚胎在原腸胚期的匯聚和遷移,導(dǎo)致了嚴(yán)重的CE缺陷表型,暗示著Ror2在原腸胚期的CE運(yùn)動(dòng)中發(fā)揮了一定的調(diào)節(jié)作用。
Ror2和Wntll共過表達(dá)能協(xié)同加強(qiáng)CE缺陷表型,并
6、且原位雜交markers(hgg、dlx3b、ntl)檢測也證明了這一結(jié)果,這暗示著斑馬魚Wntll可能通過Ror2調(diào)節(jié)CE運(yùn)動(dòng)。Ror2 Mos敲降實(shí)驗(yàn)顯示,在原腸胚期Ror2敲降后并沒有導(dǎo)致CE缺陷,產(chǎn)生這一結(jié)果的原因,我們猜測是由于胚胎中存在Rot2的母源性蛋白,而TBMO并不能將其母源性蛋白封閉住,因此敲降表型不明顯。所以,我們隨后又改用Ror2 dominant negative形式Ror2-TM進(jìn)行敲降。結(jié)果顯示,dnRor
7、2能夠?qū)е螺^為嚴(yán)重的CE缺陷,并且隨后的時(shí)期胚胎眼部間距變窄,甚至出現(xiàn)獨(dú)眼表型,表型與Wntll/silberblick突變體表型類似,暗示著斑馬魚Wntll可能會(huì)通過Ror2調(diào)控CE運(yùn)動(dòng)。因此我們同樣將Wntll MO和dnRor2進(jìn)行低劑量共顯微注射,結(jié)果同樣表明兩者的協(xié)同加成作用,并且進(jìn)一步暗示了Wntll與Ror2的相互作用。而Wntll mRNA與dnRor2共過表達(dá),顯著削弱了WntllmRNA引起的CE缺陷的表型,這一研究
8、從另一方面暗示了兩者的相互作用性。因此為了直接證明這一假設(shè),我們運(yùn)用CO-ip實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果也證明了Wntll的確能夠與Ror2相結(jié)合。為了進(jìn)一步研究Wntll通過Rot2調(diào)控CE運(yùn)動(dòng)過程中發(fā)揮重要作用的位點(diǎn),我們構(gòu)建了Rot2突變體,結(jié)果表明Ror2-Y647和-S863位點(diǎn)均能在此過程中發(fā)揮作用。
通過以上研究表明,在斑馬魚中,Wntll能夠與Ror2結(jié)合,從而調(diào)控了原腸胚期的匯聚延伸運(yùn)動(dòng),而且這一調(diào)控作用中Ror2的
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- SUN1-2對斑馬魚集中延伸運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)及其機(jī)制的研究.pdf
- Ror2調(diào)控腫瘤細(xì)胞遷移能力的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 斑馬魚翻譯延伸因子EF-2的克隆、表達(dá)譜分析及功能研究.pdf
- BBP對斑馬魚的毒性效應(yīng)研究及斑馬魚AChE基因的克隆與表達(dá).pdf
- 金雀異黃素對雄性斑馬魚VTG的誘導(dǎo)及其機(jī)理研究.pdf
- 黃連堿對HepG2細(xì)胞和斑馬魚血脂調(diào)節(jié)及降膽固醇機(jī)制研究.pdf
- 家蠶受體酪氨酸激酶樣的孤獨(dú)受體Ror2基因功能的研究.pdf
- 得克隆對斑馬魚毒性效應(yīng)的研究.pdf
- β-雙酮抗生素復(fù)合污染對斑馬魚毒性效應(yīng)的分子機(jī)理研究.pdf
- 全氟辛烷磺酸(PFOS)對斑馬魚的甲狀腺毒性及其機(jī)理初探.pdf
- PFOS和PFOA對斑馬魚胚胎的毒性研究.pdf
- 17β-雌二醇對斑馬魚的毒性研究.pdf
- 骨肉瘤中Wnt5a和Ror2蛋白的表達(dá)及其相關(guān)性研究.pdf
- 斑馬魚hepcidin-2抑菌活性的研究.pdf
- 氧化樂果對斑馬魚的毒性作用.pdf
- ROR2在白血病中作用機(jī)制及轉(zhuǎn)基因工具在血液系統(tǒng)中的應(yīng)用研究.pdf
- 斑馬魚Intelectin2蛋白功能的初步研究.pdf
- 斑馬魚Mylz2啟動(dòng)子的克隆和轉(zhuǎn)熒光蛋白基因斑馬魚、唐魚的構(gòu)建.pdf
- 斑馬魚胰腺形態(tài)學(xué)觀察及siPDX-1對斑馬魚胰島發(fā)育的影響.pdf
- 納米ZnO對斑馬魚胚胎的發(fā)育毒性研究.pdf
評論
0/150
提交評論