過(guò)氧化氫對(duì)山羊精子質(zhì)膜功能完整性、頂體酶、獲能以及核DNA的影響.pdf

1、目的：擬通過(guò)添加外源性過(guò)氧化氫，觀察其對(duì)山羊精子頂體反應(yīng)、項(xiàng)體酶、精子膜完整性以及DNA損壞的影響，為過(guò)氧化氫影響精子功能的機(jī)制提供一定的理論依據(jù)。 方法：通過(guò)檢測(cè)精子頂體反應(yīng)率、質(zhì)膜功能完整性、頂體酶陽(yáng)性率、活率以及核DNA損傷陽(yáng)性率等5個(gè)指標(biāo)來(lái)反映過(guò)氧化氫對(duì)精子部分功能的影響。實(shí)驗(yàn)共分為五部分： 第一部分采用過(guò)氧化氫與上游法獲得的優(yōu)質(zhì)精子共同體外孵育，來(lái)觀察不同濃度的過(guò)氧化氫對(duì)精子上述前四個(gè)指標(biāo)的影響； 第二

2、部分采用20μM濃度的過(guò)氧化氫與精子共同體外孵育，來(lái)觀察添加過(guò)氧化氫后，孵育時(shí)間對(duì)精子上述指標(biāo)的影響； 第三部分利用試劑盒檢測(cè)精液各成分中過(guò)氧化氫的去除劑——過(guò)氧化氫酶(CAT)的活性，通過(guò)去除精漿與添加CAT的實(shí)驗(yàn)從側(cè)面證明過(guò)氧化氫對(duì)精子功能的影響； 第四部分采用20μM濃度的過(guò)氧化氫與不同山羊個(gè)體的精子共同體外孵育，來(lái)判斷過(guò)氧化氫對(duì)不同個(gè)體的精子是否有不同的影響； 第五部分利用單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同過(guò)氧化

3、氫濃度下對(duì)精子核DNA的影響,以及冰箱低溫保存后復(fù)溫精子核DNA損傷的情況。 結(jié)果： 1、當(dāng)過(guò)氧化氫濃度在10μM和20μM之間，精子的脂膜功能完整性、頂體酶陽(yáng)性率以及精子活率沒(méi)有顯著的改變(P>0.05)；而當(dāng)添加20μM濃度的過(guò)氧化氫誘導(dǎo)精子獲能的效果要極顯著地高于其它濃度(P<0.01)。當(dāng)過(guò)氧化氫添加到50μM時(shí)，各個(gè)指標(biāo)均顯著下降，差異達(dá)到極顯著水平(P<0.01)。把過(guò)氧化氫的量最終加到100μM時(shí)，各個(gè)指標(biāo)

4、的值繼續(xù)下降； 2、精子在37℃下孵育后，彎尾率1h組與2h組相比，差異不顯著(P>0.05)。發(fā)生頂體反應(yīng)的精子數(shù)量在第3h到達(dá)最大值，其它指標(biāo)均在2h時(shí)達(dá)到最大值，并且彎尾率和活率在3～4h內(nèi)比在2～3小時(shí)內(nèi)下降的更快； 3、山羊精液中含有CAT(過(guò)氧化氫酶)，在精漿和精子中分別是216.25±3.9455U/(10<'8>個(gè)/ml)和12.12±2.3293U/(10<'8>個(gè)/ml)。當(dāng)把精液中的精漿去除以后精子

5、各個(gè)指標(biāo)均極顯著下降(P<0.01)。向精子中添加2001U的CAT時(shí)，可以極顯著地提高各個(gè)指標(biāo)(P<0.01)。但是當(dāng)CAT增加到400IU時(shí)，各個(gè)指標(biāo)變化不明顯； 4、20μM的過(guò)氧化氫對(duì)不同的山羊個(gè)體影響差異不顯著(P>0.05)； 5、隨著過(guò)氧化氫濃度的增加，精子核DNA損傷陽(yáng)性率不斷增加，當(dāng)濃度達(dá)到50μM時(shí)，精子核DNA損傷率達(dá)到30％以上。經(jīng)過(guò)冰箱低溫保存的精子，其核DNA的損傷率隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增