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1、為獲得葉片組織特異性表達(dá)強(qiáng)啟動子,該實(shí)驗(yàn)克隆改造得到四個(gè)玉米rbcS基因啟動子突變體.在啟動子的GC富含區(qū)-118定點(diǎn)突變得到T→C的突變體并將其替換pBI121質(zhì)粒上的35S啟動子構(gòu)建成新的載體pB2;在啟動子的-31位置插入了一個(gè)八核苷酸片段并將其替換pBI121質(zhì)粒子的35S啟動子構(gòu)建成新的載體pB8;用rbcS的5'端470bp片段與35S啟動子構(gòu)建470bp+35S組合啟動子結(jié)構(gòu)的載體pB20;用GC富含區(qū)-118→C點(diǎn)突變得
2、到的突變體的3'端324bp與35S啟動子構(gòu)建324bp+35S雙啟動子結(jié)構(gòu)載體pB13.另外,還用未經(jīng)濟(jì)修飾的rbcS啟動子替換了35S啟動子構(gòu)建了載體pB9,作為對照.在煙草原生質(zhì)體中對改造后的啟動子表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行了瞬時(shí)表達(dá)的檢測.測定結(jié)果表明pB13的雙啟動子結(jié)構(gòu)表現(xiàn)出了最大的活性,是rbcS啟動子的4倍,是35S啟動子的1.4倍.pB20與p2表達(dá)強(qiáng)度相關(guān)不大,都是rbcS啟動子的3倍,是35S啟動子的1.2倍.p8沒有明顯的增強(qiáng)
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