石栗種子主要內(nèi)含物變化及accD基因的克隆研究.pdf

1、石栗，系大戟科木本油料作物，其種子含有豐富的油脂，是一種極其重要的生物質(zhì)能源植物。本文首先對(duì)石栗不同單株成熟果實(shí)中種子主要內(nèi)含物含量進(jìn)行了測(cè)定與比較分析及石栗果實(shí)在不同發(fā)育時(shí)期中種子可溶性蛋白、可溶性糖和油脂的含量進(jìn)行測(cè)定研究。隨后，克隆石栗嫩葉ACCase中β-CT亞基（羧基轉(zhuǎn)移酶）的accD基因的全長(zhǎng)cDNA序列，并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析，為今后利用該基因和提高油料作物種子含油量的研究提供參考。最后，以石栗樹嫩葉為材料，用RT-PC

2、R克隆出石栗樹嫩葉中actin基因片段，為研究其它基因在石栗嫩葉中的表達(dá)和調(diào)控提供內(nèi)參。本論文的主要研究結(jié)果如下:
　　 1、石栗種子內(nèi)含物變化的動(dòng)態(tài)研究
　　 石栗不同單株的果實(shí)出仁率、種子含水量、油脂和蛋白質(zhì)的含量均存在不同程度的差異，而且種子含水量的高低與果實(shí)出仁率、油脂及蛋白質(zhì)的含量之間存在相關(guān)性。不同的石栗單株油脂含量在62％～68％之間，石栗種子蛋白質(zhì)含量在15％～23％之間。種子發(fā)育過程中，可溶性蛋白最高含

3、量為開花后180天達(dá)到210.32 mg/g，最低含量為開花后75天達(dá)到66.34 mg/g;種子可溶性糖最低含量為開花后180天達(dá)到32.05mg/g，可溶性糖的最高含量開花后105天達(dá)到99.52 mg/g;種子油脂的最高含量為開花后180天達(dá)到68.33％，最低含量為開花后75天達(dá)到8.15％。
　　 2、石栗accD基因的全長(zhǎng)cDNA克隆及序列分析
　　 根據(jù)已知植物（如麻風(fēng)樹和蓖麻）accD基因的保守區(qū)域設(shè)計(jì)簡(jiǎn)

4、并引物，以石栗嫩葉為材料提取總DNA和總RNA，利用簡(jiǎn)并PCR和RACE技術(shù)克隆accD基因的全長(zhǎng)cDNA序列為1789bp，其包含1509bp的開放閱讀框，可編碼503個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。Genbank登錄號(hào)為:KC255250，并命名為amaccD。
　　 3、石栗actin基因片段的克隆及序列分析
　　 以石栗嫩葉為材料，利用RT-PCR技術(shù)克隆actin基因一段長(zhǎng)度為396bp的核苷酸序列，可編碼132個(gè)氨基酸的蛋