蘋果組培苗不定根發(fā)生過程中mRNA差異顯示表達及生根移栽體系優(yōu)化研究.pdf

1、試驗以蘋果矮化砧木組培苗M26為試材，應用mRNA差異顯示技術，初步建立了蘋果矮化砧木生根過程中的相關基因篩選體系。同時以M26為試材，建立了蛭石替代瓊脂生根體系。以蘋果組培苗SH28、SH29為試材研究了生根組培苗移栽過程中環(huán)境因素對幼苗生長的影響，主要研究結果如下:
　　 1、蘋果組培苗mRNA差異顯示PCR優(yōu)化后結果:退火溫度為45℃，20μL PCR體系為:稀釋10倍的模板cDNA2μL，Taq酶2.0 U，上游隨機引物

2、和下游錨定引物1∶1配比，濃度分別為2.5μmol·L-1，dNTPs加入量為125μmol·L-1。采用優(yōu)化后的PCR程序及體系，用8個上游隨機引物和3個下游錨定引物共計24對引物對樣品進行PCR擴增，有11對引物可擴增出條帶，其中9對引物得到了較好的擴增結果，主帶清晰，擴增的帶型差異明顯，共計擴增出41條差異基因，其中38個特異表達，2個在誘導后上調表達基因，1個在誘導后下降表達的基因。
　　 2、將組培苗在含有0.6 mg

3、·L-1 IBA的瓊脂生根培養(yǎng)基中誘導7d～9d后，扦插于蛭石培養(yǎng)基中，生根率均達94％以上，顯著高于瓊脂培養(yǎng)基處理，且側根數(shù)量顯著大于誘導11d～13d和瓊脂培養(yǎng)基處理。蛭石培養(yǎng)基中添加20 g·L-1蔗糖，生根率達95.18％，生根條數(shù)、側根數(shù)和根長顯著優(yōu)于未添加蔗糖處理。基質水分含量也明顯影響生根，50％～90％水分條件下，生根率均在96％以上，顯著高于瓊脂培養(yǎng)基，生根條數(shù)各處理間無差異，側根數(shù)以50％～60％含水量最高，達6.6

4、9和6.46，顯著高于其他處理，根長以瓊脂培養(yǎng)基最大，為2.89 cm。經(jīng)100 mg·L-1 IBA速蘸處理后，扦插于含有20 g·L-1蔗糖、60％含水量的蛭石培養(yǎng)基中，生根率顯著提高，達到100％，生根數(shù)目、根長、側根數(shù)目得到了大幅度提高，根系質量得到明顯的改善。
　　 3、采用建立的蛭石生根培養(yǎng)體系，進行組培苗瓶外生根研究。結果表明組培苗在含有0.6 mg·L-1 IBA的瓊脂生根培養(yǎng)基中誘導4d，移至溫室煉苗5d后直接

5、扦插于蛭石基質中，4～5d澆灌一次不含蔗糖的1/2MS營養(yǎng)液，組培苗生根率、生根條數(shù)和根長與瓶內生根培養(yǎng)無明顯差異，但側根數(shù)目顯著提高，同時大大縮短了育苗時間。
　　 4、生根組培苗在培養(yǎng)室培養(yǎng)8d，移至溫室鍛煉17d后移栽，組培苗生長量明顯增加，為最佳時間組合。組培苗在培養(yǎng)室培養(yǎng)8d，溫室鍛煉11d、17d、25d三個處理中，也以17d為最佳煉苗時間，移栽組培苗株高、葉片數(shù)、單株葉面積和單葉片面積均有明顯提高。以草炭土與蛭石1