PtFLC選擇性剪切本的遺傳轉(zhuǎn)化及功能分析.pdf

1、枳作為柑橘類植物唯一的落葉植物，需要經(jīng)過(guò)冬季低溫才能開花，這一現(xiàn)象與其體內(nèi)春化途徑關(guān)鍵基因的表達(dá)聯(lián)系緊密。FLOWERING LOCUSC(FLC)是植物春化途徑調(diào)控成花的中心基因。枳在不同發(fā)育時(shí)期FLC存在選擇性剪切程序性改變，并獲得了五個(gè)不同的FLC轉(zhuǎn)錄本，分別命名為PtFLCV1～PtFLCV5。其中，PtFLCV1和PtFLCV2在幼年期表達(dá)，PtFLCV4和PtFLCV5在成年期表達(dá)，而PtFLCV3在早實(shí)枳的整個(gè)發(fā)育階段都有

2、表達(dá)。
　　 本研究分別構(gòu)建了PtFLCV1～PtFLCV5的超表達(dá)載體，并在早實(shí)枳及椪柑中超量表達(dá)，對(duì)不同轉(zhuǎn)錄本的表達(dá)進(jìn)行了初步的分析及驗(yàn)證，旨在找出不同轉(zhuǎn)錄本之間可能存在的差異性功能。主要研究結(jié)果如下：⑴35S∷PtFLCV1～PtFLCV5超表達(dá)載體的構(gòu)建及早實(shí)枳轉(zhuǎn)化。構(gòu)建了兩種融合表達(dá)載體，包括35S∷PtFLCV1-GFP～PtFLCV5-GFP和35S∷PtFLCV1-FLAG～PtFLCV5-FLAG，并獲得PtF

3、L CV4-FLAG、PtFLCV5-FLAG超表達(dá)早實(shí)枳陽(yáng)性植株。早實(shí)枳陽(yáng)性植株經(jīng)DNA水平PCR檢測(cè)及RNA水平的表達(dá)分析獲得證實(shí)。⑵超表達(dá)植株中PtFLC的表達(dá)分析。qRT-PCR結(jié)果表明，PtFLCV4和PtFLCV5的陽(yáng)性植株均表現(xiàn)出了高表達(dá)量。與野生型對(duì)照相比，PtFLCV5的三株超表達(dá)植株中表達(dá)水平高達(dá)5000倍以上，而PtFLCV4超表達(dá)植株中FLC基因的表達(dá)量為野生型對(duì)照20～300倍。⑶超表達(dá)植株中PtSOC1、Pt

4、FT的表達(dá)分析。SOC1和FT為FLC的下游負(fù)調(diào)控靶基因。本研究檢測(cè)結(jié)果顯示:所有PtFLC超表達(dá)植株中PtSOC1的表達(dá)量與野生型對(duì)照相差一個(gè)數(shù)量級(jí)以上，表明PtSOC1嚴(yán)格響應(yīng)PtFLC的負(fù)調(diào)控;而PtFT在兩種不同轉(zhuǎn)錄本轉(zhuǎn)化后代中下調(diào)程度不一致，可能與其轉(zhuǎn)錄本結(jié)構(gòu)差異有關(guān)。⑷PtFLC-FLAG五個(gè)轉(zhuǎn)錄本轉(zhuǎn)化椪柑胚性愈傷組織。經(jīng)過(guò)篩選得到包括pCAMBIA1302、PtFLCV1、PtFLCV2、PtFLCV5四種轉(zhuǎn)錄本類型的抗性