硅轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因CSiT-1和CSiT-2克隆表達(dá)與轉(zhuǎn)化黃瓜研究.pdf

1、黃瓜（Cucumis sativus L.）是世界上普遍栽培的重要園藝作物之一，是我國設(shè)施栽培的第一大園藝作物，在我國蔬菜生產(chǎn)和消費(fèi)中占有舉足輕重的地位。
　　 雙子葉植物硅吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)和積累等生理機(jī)制方面已有大量研究，但其分子調(diào)控機(jī)制方面研究較少，存在許多科學(xué)問題有待進(jìn)一步分析。本課題以中農(nóng)8號(hào)黃瓜為試驗(yàn)材料，從黃瓜中克隆出與硅轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因CSiT-1和CSiT-2，構(gòu)建其真核表達(dá)載體，并采用營養(yǎng)液栽培，研究不同濃度外源硅(Na

2、2SiO3·9H2O)處理對(duì)黃瓜硅轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因CSiT-1和CSiT-2表達(dá)情況的影響。試驗(yàn)所得結(jié)果如下:
　　 (1)從黃瓜植株中克隆出硅轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的基因CSiT-1和CSiT-2片段，CSiT-1的序列全長為876bp，編碼292個(gè)氨基酸，CSiT-2的序列全長為786bp，編碼262個(gè)氨基酸。將它們分別在GenBank注冊(cè)，基因CSiT-1注冊(cè)號(hào)為FJ595947，基因CSiT-2注冊(cè)號(hào)為FJ595948。
　　 (

3、2)經(jīng)測(cè)序和同源序列分析表明，從黃瓜植株中分離克隆所得的CSiT-1和CSiT-2基因序列與NCBI中硅轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因同源性較高，所得的CSiT-1和CSiT-2為黃瓜的硅轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因。
　　 (3)將獲得的CSiT-1和CSiT-2基因與含有35S啟動(dòng)子的pBI-121載體重組，構(gòu)建正義表達(dá)載體，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化黃瓜，現(xiàn)已獲得轉(zhuǎn)基因植株，正在對(duì)其T1代進(jìn)行篩選及分析。
　　 (4)在低硅(0.02mM)濃度和高硅(1