橘小實蠅rpl19 dsRNA對橘園非靶標昆蟲干擾效應研究.pdf

1、RNAi是由雙鏈RNA所引起的特異性基因沉默。喂食dsRNA達到RNAi效應在很多昆蟲上取得成功，在害蟲防治上表現(xiàn)出廣泛的應用潛力，但是目前缺乏對于RNAi的安全性評價，因此評價RNAi包括對天敵和益蟲等非靶標昆蟲的干擾效應在內(nèi)的環(huán)境安全性具有非常重要的意義。
　　本研究選取橘小實蠅Bactroceradorsalis作為靶標昆蟲，rpl19基因作為靶標基因，選擇近緣種柑橘大實蠅Bactroceraminax，天敵長尾潛蠅繭蜂Di

2、achasmimorphalongicaudata，益蟲意大利蜜蜂Apismellifera作為非靶標生物，同時喂食小實蠅rpl19基因不同片段的dsRNA，利用Real-timePCR等分子生物學技術檢測各個昆蟲rpl19的表達情況，研究昆蟲dsRNA對非靶標昆蟲的干擾效應，為RNAi用于害蟲防治提供安全性評價的參考依據(jù)。主要研究結果如下:
　　1.成功克隆了橘小實蠅、柑橘大實蠅、長尾潛蠅繭蜂和意大利蜜蜂rpl19基因cDNA全

3、長?；蛲葱苑治鼋Y果顯示橘小實蠅rpl19基因ORF區(qū)域核酸序列與柑橘大實蠅同源性高達93％，與長尾潛蠅繭蜂同源性達72％，與意大利蜜蜂有68％的同源性。用CLUSTALX2.0將橘小實蠅rpl19氨基酸序列與柑橘大實蠅、長尾潛蠅繭蜂、意大利蜜蜂rpl19基因氨基酸序列同源性比對，結果顯示橘小實蠅rpl19基因氨基酸序列與柑橘大實蠅、長尾潛蠅繭蜂、意大利蜜蜂同源性高達90％以上。
　　2.Real-timePCR結果表明，喂食靶

4、標昆蟲自身rpl19基因dsRNA可以在橘小實蠅、柑橘大實蠅、長尾潛蠅繭蜂和意大利蜜蜂中均產(chǎn)生RNAi效應，喂食Bdrpl19dsRNA后橘小實蠅rpl19基因表達分別下調(diào)50％，喂食Bmrpl19dsRNA后，柑橘大實蠅rpl19基因表達下調(diào)達90％以上，喂食Dlrpl19dsRNA后長尾潛蠅繭蜂rpl19基因表達下調(diào)40％，而喂食Amrpl19dsRNA后意大利蜜蜂rpl19基因表達下調(diào)了50％。
　　3.dsRNA對非靶標昆

5、蟲的干擾效應研究結果顯示喂食橘小實蠅Bdrpl19CDSdsRNA后，柑橘大實蠅rpl19基因表達水平下調(diào)了50-70％，長尾潛蠅繭蜂rpl19基因表達水平下調(diào)了40％，而意大利蜜蜂rpl19基因表達量沒有變化，但喂食Bdrpl193'UTRdsRNA對三種非靶標昆蟲都沒有干擾效應。而dsRNA片段核酸序列的比對結果顯示柑橘大實蠅和長尾潛蠅繭蜂rpl19基因序列與橘小實蠅rpl19序列存在19-23bp完全同源的片段，而意大利蜜蜂rpl