不同倍性泥鰍鰭細(xì)胞培養(yǎng)及分子細(xì)胞遺傳學(xué)研究.pdf

1、為探討不同倍性泥鰍染色體組構(gòu)成及建立活體制備染色體標(biāo)本的方法,本研究以自然二倍體泥鰍、正反雜交三倍體泥鰍(4n♀×2n♂、2n♀×4n♂)、自然四倍體泥鰍為研究對(duì)象,利用鰭組織培養(yǎng)獲得染色體制備的材料,建立了泥鰍鰭組織細(xì)胞制備染色體標(biāo)本方法,同時(shí)對(duì)不同倍性泥鰍鰭組織培養(yǎng)細(xì)胞的染色體的數(shù)目、核型做了分析,利用Ag-NORs、CMA3/DA/DAPI三重?zé)晒馊旧夹g(shù)等對(duì)不同北行泥鰍的染色體帶型作了進(jìn)行了系統(tǒng)研究。
　　1.不同倍性泥鰍

2、鰭細(xì)胞培養(yǎng)及染色體標(biāo)本制備方法的建立
　　選擇10％的碘伏溶液殺菌效果良好,對(duì)于細(xì)胞生長影響較小,尤以15min效果最明顯,細(xì)胞遷出迅速;在終止培養(yǎng)前3h加入秋水仙素至終濃度為1.5μg/ml,自然二倍體、雜交三倍體(4n♀×2n♂)、自然四倍體泥鰍鰭細(xì)胞中期分裂相染色體眾數(shù)最高,分別為93.33％、90％、70％;25℃低滲處理40min,可以獲得大量圖像清晰、長度適中、分散良好、數(shù)目完整的染色體中期分裂相。
　　2.不同

3、倍性泥鰍染色體帶型研究
　　(1)Ag-NORs:自然二倍體泥鰍鰭培養(yǎng)的細(xì)胞染色體中期分裂相中Ag-NORs數(shù)為2對(duì),正反雜交三倍體泥鰍(4n♀×2n♂、2n♀×4n♂)鰭培養(yǎng)的細(xì)胞染色體中期分裂相中Ag-NORs數(shù)為3對(duì),自然四倍體泥鰍鰭培養(yǎng)的細(xì)胞染色體中期分裂相中Ag-NORs數(shù)為4對(duì)。
　　(2)CMA3/DA/DAPI三重?zé)晒馊旧?自然二倍體泥鰍鰭培養(yǎng)的細(xì)胞染色體中期分裂相中CMA3陽性位點(diǎn)為2對(duì),正反雜交三倍體泥鰍

4、(4n♀×2n♂、2n♀×4n♂)鰭培養(yǎng)的細(xì)胞染色體中期分裂相中CMA3陽性位點(diǎn)均為3對(duì),自然四倍體泥鰍鰭培養(yǎng)的細(xì)胞染色體中期分裂相中CMA3陽性位點(diǎn)為4對(duì)。
　　(4)Ag-NORs、CMA3/DA/DAPI熒光顯帶在染色體上的位置位于第1對(duì)中部著絲粒染色體(M1)的短臂末端,也就是核仁組織區(qū)的位置。
　　綜上所述,利用不同倍性泥鰍鰭培養(yǎng)的細(xì)胞可以達(dá)到活體制備染色體的目的,能得到連續(xù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果;對(duì)不同倍性泥鰍鰭細(xì)胞制備的染