葵花籽粕中綠原酸和蛋白酶解肽的制備及生物活性研究.pdf

1、葵花籽榨取油脂后的籽粕中含有豐富的綠原酸和蛋白質(zhì)。綠原酸是一種非常好的抗氧化劑，葵花籽粕蛋白因其氨基酸含量豐富且平衡良好、生物利用率高和無(wú)抗?fàn)I養(yǎng)因子而被作為植物蛋白的重要來(lái)源，也是獲得生物活性肽的很好資源。目前，對(duì)葵花籽粕中綠原酸和蛋白質(zhì)、葵花籽多肽生物活性方面的深入研究報(bào)道相對(duì)較少。本文以葵花籽粕為研究對(duì)象，采用響應(yīng)面設(shè)計(jì)、抗氧化試驗(yàn)、生物酶解、凝膠色譜、高效液相色譜、質(zhì)譜等方法，系統(tǒng)研究了葵花籽粕中綠原酸和蛋白質(zhì)的提取工藝條件及理化

2、性質(zhì)、蛋白質(zhì)酶解工藝的各主要參數(shù)、酶解物體外抗氧化活性和對(duì)血管緊張素I轉(zhuǎn)換酶(ACE)的抑制作用、抗氧化肽和降血壓肽分離和結(jié)構(gòu)的初步鑒定，為開(kāi)發(fā)利用葵花籽粕中綠原酸和蛋白質(zhì)及其抗氧化肽、降血壓肽功能性產(chǎn)品提供理論基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下：
　　1．葵花籽粕中綠原酸提取的優(yōu)化工藝條件：乙醇濃度為75%、料液比為1∶14、溫度為40℃、pH為4.9、提取99min，萃取率達(dá)到了64.73%，其抗氧化能力在同等劑量的條件下，其還原力和對(duì)自由基

3、的清除能力都高于Vc。
　　葵花籽粕中球蛋白提取的最佳工藝條件為：料液1:12，提取液濃度1 mol/L，溫度50℃，時(shí)間1.5h。葵花籽粕球蛋白功能性質(zhì)除吸水性低于大豆分離蛋白外，其吸油性、起泡性、起泡穩(wěn)定性、乳化性和乳化穩(wěn)定性都高于大豆分離蛋白，并且是一個(gè)全價(jià)蛋白。
　　2．以葵花籽粕球蛋白為底物，篩選出制備抗氧化活性肽的酶是堿性蛋白酶和木瓜蛋白酶；制備降血壓活性肽的酶是中性蛋白酶。在各自單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面設(shè)

4、計(jì)進(jìn)行了試驗(yàn)優(yōu)化，結(jié)合各因素、各因素對(duì)響應(yīng)值的影響順序以及綜合考慮到成本問(wèn)題，確定了各自最佳酶解條件。其中：
　　堿性蛋白酶：底物濃度為2%，pH為9.64，[E]/[S]3%，溫度為51.31℃，時(shí)間為115.4min，該條件下制備的葵花籽粕球蛋白酶解物的DPPH清除率為50.85%。
　　木瓜蛋白酶的最優(yōu)酶解條件為：底物濃度為3%，pH為6.5，[E]/[S]5.54%，溫度為61.02℃，時(shí)間為116.39min，該條

5、件下制備的葵花籽粕球蛋白酶解物的DPPH清除率為73.11%。
　　中性蛋白酶：底物濃度4%，[E]/[S]2.72%，溫度52℃，pH7.0，水解時(shí)間為90 min，該條件下制備的葵花籽粕球蛋白酶解物的ACE抑制率為61.55%，其半抑制濃度為0.45mg/mL。
　　3.木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶酶解物在5種體外抗氧化體系中均表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗氧化活性。對(duì)·OH、O2-·、DPPH·清除作用以及還原能力均與濃度呈量效關(guān)系，IC5

6、0分別為5.7mg/mL、2.5mg/mL、1.5mg/mL左右，能明顯抑制大豆卵磷脂的脂質(zhì)過(guò)氧化和豆油的氧化作用，隨著添加量的增加，其抗氧化效果越來(lái)越明顯。
　　4．凝膠色譜、液相色譜能很好的分離提純活性較強(qiáng)的酶解物，質(zhì)譜能進(jìn)一步確定分子量及初步結(jié)構(gòu)。中性蛋白酶酶解物峰2的分子量為1114.5：推測(cè)其氨基酸序列為DLWLRLDPS(Asp-Leu-Trp-Leu-Arg-Leu-Asp-Pro-Ser)，中性蛋白酶峰3的分子量為

7、1114.6，推測(cè)其氨基酸序列為 DLPWPFRSP（Asp-Leu-Pro-Trp-Pro-Phe-Arg-Ser-Pro）；木瓜蛋白酶酶解物峰2的分子量是1261.6，推測(cè)其氨基酸序列為FDIVKADNVGPS(Phe-Asp-Ile-Val-Lys-Ala-Asp-Asn-Val-Gly-Pro-Ser)；堿性蛋白酶的分子量為1038.5，推測(cè)氨基酸序列為 RHAKTPSNK(Arg-His-Ala-Lys-Thr-Pro-Ser