竹鼠腸道兼性厭氧纖維素降解菌的分離、鑒定及其產(chǎn)酶活性研究.pdf

1、農(nóng)作物副產(chǎn)品如秸稈等含有很高的纖維素成分,是一種潛在的自然資源,在全球資源危機(jī)的今天,利用其大力發(fā)展畜牧業(yè),不僅可以充分利用資源,還能避免因秸稈燃燒對生態(tài)環(huán)境造成的污染。利用纖維素酶分解纖維素是利用纖維素資源的有效手段之一,目前產(chǎn)纖維素酶菌株多分離自反芻動物瘤胃液、堆肥、土壤等,所得降解纖維素能力較強(qiáng)的菌株多為厭氧菌株,由于培養(yǎng)條件嚴(yán)格,在生產(chǎn)中的應(yīng)用得到限制。本研究以竹鼠腸道內(nèi)容物作為微生物來源,從中分離篩選出優(yōu)良的兼性厭氧產(chǎn)纖維素酶

2、菌株,為最大限度開發(fā)利用纖維素資源奠定基礎(chǔ),同時(shí)促進(jìn)新能源、食品、以及畜牧業(yè)等相關(guān)行業(yè)的快速發(fā)展。本研究主要包括以下四部分內(nèi)容:
　　試驗(yàn)一:通過嚴(yán)格厭氧結(jié)合需氧培養(yǎng),以羧甲基纖維素鈉為唯一碳源對竹鼠腸道內(nèi)容物進(jìn)行涂布培養(yǎng),初步分離出具有降解纖維素能力的菌株后,結(jié)合剛果紅染色以及酶活測定復(fù)篩出所需目的菌株。試驗(yàn)結(jié)果顯示,從竹鼠回腸、盲腸、結(jié)腸共得到17株菌株,根據(jù)菌株形態(tài)篩選出7株疑似纖維素降解菌,分別為來自竹鼠回腸的H-1、H-

3、2菌株;盲腸的M-1、M-2、M-3菌株;結(jié)腸的J-1、J-2菌株;結(jié)合剛果紅染色法所得到的透明圈與菌落直徑比,測定其發(fā)酵液酶活后,顯示M-2、M-3酶活較高,分別為0.5029 U/mL、0.4874 U/mL。
　　試驗(yàn)二:將來自盲腸的M-2、M-3菌株作為目的菌株,通過形態(tài)學(xué)觀察、革蘭氏染色觀察,菌株生理生化實(shí)驗(yàn),以及分子生物學(xué)鑒定確定該菌的種或?qū)?。試?yàn)結(jié)果證明:來自于竹鼠盲腸的M-2、M-3菌株的形態(tài)學(xué)特征觀察結(jié)果,結(jié)合生

4、理生化實(shí)驗(yàn),并分別利用PCR對其16SrDNA序列擴(kuò)增,經(jīng)過克隆、測序后,在 Genbank數(shù)據(jù)庫里面 BLAST結(jié)果表明,M-2屬于腸桿菌科的沙雷氏菌屬(Serratia),M-3菌株確定為肺炎克伯雷氏菌(Klebsiella pneumoniae)。
　　試驗(yàn)三:挑選酶活相對較高的來自盲腸的M-2菌株作為目的菌株,測定不同發(fā)酵時(shí)間、碳源、氮源、接種量、溫度及初始pH值對菌株M-2產(chǎn)酶活性的影響,對其產(chǎn)酶性質(zhì)進(jìn)行研究。試驗(yàn)結(jié)果表