蝦的組織培養(yǎng)和對(duì)蝦無(wú)包涵體桿狀病毒的初步研究.pdf

1、華中師范大學(xué)碩士學(xué)位論文蝦的組織培養(yǎng)和對(duì)蝦無(wú)包涵體桿狀病毒的初步研究姓名：劉凱于申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病毒學(xué)指導(dǎo)教師：余澤華19990501P r i m a r yS t u d i e so nS h r i m pT i s s u eC u l t u r ea n dP e n a e i dS h r i m pN o n —o c c l u d e dB a c u l o v i r u s e sA b s t r

2、 a e tT h i s t h e s i s r e p o r t e d t h e p r i m a r y s t u d i e s o n s h r i m p t i s s u e c u l t u r e s a n d p e n a e i dv i r u s e s ．T h es h r i m p sf o rt i s s u ec u l t u r ei n c l u d e dC o

3、m b a t s d a r k i i ，M a r o b r a c h i u m r o s e n b e r g i ia n d P e n a e u sm o n o d o n - T h e h e m o c y t e ，l y m p h o i do r g a n ，h e m a t o p o i e t i c t i s s u e ，g o n a l d ，e m b r y o n ，h

4、 e p a t o p a n c r e a sa n d h e a r t w e r e e x p e r i m e n t e di n a l o t o fm e d i a ，a n do n l ys o m et i s s u e sc o u l d a t t a c ha n d g r o w ，h u ta l l o ft h e mc o u l d n ’th e s u b c u l t

5、u r e d ．T h et i s s u e sf r o mg o n a l d ．e m b r y o n a n dh e m o c y t so fc r a y f i s h c o u l da t t a c ha n dg r o wi nS 1 9 + 2 0 ％F B S ，p H7 ．0 a t 2 8 ℃．T h et i s s u ef r o m t h eg o n a l d a n d

6、h e m o c y t e so fM a c r o b r a c h i u mr o s e n b e r g i ic o u l d a l s oa t t a c ha n dg r o wi nL 1 5 十5 9 ／LN a C I + 1 0 ％F B S ，p H7 ．0a t 2 8 ℃．T h et i s s u e sf r o ml y m p h o i do r g a n ，h e m a

7、t o p o i e t i co r g a n a n dh e m o c y t e s o fP e n a e u s m o n o d o na t t a c h e da n do f e n f o r m e dc e l l m o n o l a y e r i n 8 5 ％L 1 5 十l 5 ％F B S + 7 ．5 9 ／L N a C I + 0 ．3 2 9 ／LK C I +。1 ．0 2

8、9 ／L M g C l 2 ·6 H 2 0 + 0 ．4 9 9 ／L M g S O 。·7 H 2 0 + 2 ．0 0 9 ／LC a C l 2 ·2 H 2 0 + 0 ．3 0 9 ／Lg l u c o s e ，p H7 ．0 a t 2 8 ℃。Af e wd i f f e r e n t p e n a e i ds h r i m pv i r u s e sw e r ef o

9、 u n d ．P r i m a r ys t u d i e so nt h e i r u l t r a —s t r u c t u r e ，m o r p h o g e n e s i s ’h i s t o p a L h o I o g i c a lc h a n g e s ，i n f e c t i o n i nv i v oa n dv i t r o ，i s o l a t i o na n d p

10、 u r i f i c a t i o n ，a n dd e t e c t i a nb y P C R w e r ea t t e m p t e dt Oi n i t i a t e ．F i r s t ，t W On o n —o c c l u d —e dh a c u l o v i r u s e s w e r ed e t e c t e d ．As i m i l l a rr o d —s h a p

11、e d t Oe l l i p t i c a l v i r u s p a r t i c l eo fs i z eo f1 2 0 ～1 4 0 X 2 4 0 ～Z S S n m s u r r o u n d e d b yt y p i c a lt r i l a m i n a re v e l o pW S Sf o u n di nt h eh y —p e r t r o p h i e dn u c l e

12、 io fi n f e c t e dc e l l s ，i nd i s e a s e d P e n a e u $ c h i n e s i s c o l l e c t e di n Y a n t a i ．T h ev i r u sW a St e n t a t i v e l y c l a s s i f i e d a sa m e m h e ro fg e n u s n o n —o c c l u

13、 d e db a c u l o v i r u s ( N O B ) o ft h es u b f a m i l yN u d i b a c u l o v i r i n a eo fB a c u l o v i r u s ．I tc o u l di n f e c tP e n a e u sr n o n o d o nb yf e e d —i n g ，b u tp e r h a p st h ev i r

14、 u s c o u l d n ’ti n f e c t s o m ei n s e c tc e l l s i n v i t r o ．A n o t h e r n o n —o e c l u d —e db a c u l o v i r u sd e r i v e df r o r nd i s e a s e d s h r i m p sc o l l e c t e di nR i z h a oW S Sd

15、 i f f e r e n t f r o mi t ．I tr e p l i c a t e d i n c y t o p l a s m ，w h o s es i z ew a s1 3 0 ×3 4 0 n m ．T h e m o r t a l i t y o fi n f e c t e d P e n a e u sc h i n e s i sh yf e e d i n gw a s8 0 ％i n5

16、 d a y s ．T h ev i r u sd i d n ’ts u c c e e di ni n f e c t i n gc r a y f i s hi nv i v oa n dp r i m a r yc e i l s o fO k a f r o mP e n a e u s m o n o d o n ．H y p e r t r o p h i e dn u c l e iw i t he s o i n o

17、p h i l i cc i r c l e O rs q u a r e i n c l u s i o nb o d i e sw e r e d e t e c t —e d i n s o m e c e i l so f h e p a t o p a n c r e a s a n dm i d —g u t i n a f e wd i s e a s e d s h r i m p sc o l l e c t e d

18、i nR i z h a o ．T h e r em u s tb e a n o t h e rd i f f e r e n tv i r a lp a t h o g e ni n P e n a e u s c h i n e s i s ．K e yW o r d s ：t i s s u e c u l t u r e ，p e n a e i ds h r i m p v i r u s ．t i s s u ep a t