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文檔簡介
1、利用小麥黃花葉病毒(WYMV)提純病毒作為抗原,免疫豚鼠制備特異性的WYMV豚鼠抗血清,采用微量沉淀法及免疫雙擴散測定其效價為2<'7>.建立了以豚鼠抗血清為誘捕抗體、以兔抗血清為檢測抗體的異種動物雙抗夾心法檢測WYMV的實驗方法.選擇有代表性的小麥品種或育種材料26份,并從日本和美國收集到用于區(qū)分株系材料6份,在河南潢川、湖北羅田、四川雅安、江蘇揚州四地進行致病性分化田間試驗,根據(jù)品種的反應,并結(jié)合ELISA、RT-PCR、Weste
2、rn-blotting等方法進行致病性分化檢測.通過RT-PCR,獲得了WYMV湖北羅田分離物細胞質(zhì)內(nèi)含體蛋白(CI,cylindrical inclusion protein gene)基因的cDNA克隆.將含有WYMV CI基因的重組質(zhì)粒經(jīng)NdeI和EcoRI酶切、克隆到pET-28a(+)上,構(gòu)建了原核表達載體pETCIb,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),經(jīng)IPTG誘導后表達出37kDa蛋白.純化表達產(chǎn)物后,免疫家兔制備抗血清.經(jīng)
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