油菜Oleosin基因克隆及其與GUS基因融合子表達載體的構(gòu)建.pdf

1、西南農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文油菜Oleosin基因克隆及其與GUS基因融合子表達載體的構(gòu)建姓名：眭順照申請學位級別：碩士專業(yè)：細胞生物學指導教師：李名揚2003.5.1馥鴦表娩太學二o o 三輕強。i ? 學緣詫旦 A b s t r a c tC l o n i n g a l l O l e o s i nG e n e f r o m B r a s s i c a n a p u s a n dC o n s t r u c t i

2、 o n o f P l a n t E x p r e s s i o n V e c t o r s H a r b o r i n g O l e o s i n —G U S F u s i o nc a n d i d a t e ： S u i s h u n —z h a oA d v i s o r ：P r o f ．L iM i n g —y a n g( B i o t e c t m o l o g y R e

3、s e a r c h C e n t e r ，S o u t h w e s t A g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y ，C h o n g q i n g 4 0 0 7 16 )A b s t r a c tT h ec o n s t r u c t i o n o f a s u i t a b l e o l e o s i n 。f u s i o n e x p r e

4、s s i o n v e c t o ri s n o to n l yu s e f u l i np r o m o t i n g p l a n t b i o r e a c t o r d e v e l o p m e n t ，b u t a l s o u s e f u l i n r e s e a r c h i n g i n s t e r i l i t y ,s e l f - i n c o m p

5、a t i b i l i t y , a n t i —d i s e a s ea n d i n s e c t ，p o l l e nn u t r i t i o n ，h i 醢c r o p y i e l d , t h es a f e t y o f g e n ee n g i n e e r i n g ，I ti sv a l u a b l eb o t hi nt h e o r e t i ca n d

6、p r a c t i c e ．I nt h i sp a p e r , a no l e o s i ng e n ew a sc l o n e df r o mb r a s s i c a n a p u s ，t h r e ee x p r e s s i o nv e c t o r sh a r b o r i n go l e o s i n - O U Sf u s i o nw e r ec o n s t r

7、 u c t e da n dt r m l s f o r m e dl e a fd i S c so f P e t u n i a ．T h em a i ne x p e r i m e n ta n dr e s u l t a r ca sf o l l o w s ：1 。 C l o n i n g a n d s e q u e n c e a n a 地s t so f O T S g e n e f r a g

8、m e n t f r o m B r a s s i c a n a p u sT h eo l e o s i ng e n ef r a g m e n tw a sa m p l i f i e db ym e a n so fP e R 撼遨g e n o m i eD N A o fB r a s s i c an a p u sa st e m p l a t ea n dap a i ro f s p e c i f i

9、 co l i g o n u c l e o t i d e sa t5 ’一a n d 3 ’．e n da sp r i m e r , a n d c l o n e di n t o 鼠c o i lv e c t o r ．T h ev e c t o rw a s n a m e d p U C ．O T S ．R e s u l t s s h o w e d t h a t t h eD N A s e q u e n

10、 c ec o n s i s t e do f 9 8 9 蜘a n d e n c o d e d1 9 6a m i n oa c i dr e s i d u e sd e d u c e d f r o mD N As e q u e n c e ，w h i c hh a d a ni n t r o n ．E x c e p t f o r t h e e x t r a2 9 b p ．c o m p a r i s o

11、 n w i t h p r e v i o u s l yp u b l i s h e ds e q u e n c es h o w e d7 9 ．2 0 ％h o m o l o g i e si nn u c l e o t i d es e q u e n c ea n d 9 1 ．2 1 ％i na m i m )a c i ds e q u e n c e r e s p e c t i v e l y ．2

12、83; O b t a i n i n g o f O T S - G U S f u s i o n g e n e a n d p r e d i c t i n g t h ec h a r a c t e r o f f u s i o n p r o t e i nO l e o s i ng e n ef r o mB r a s s i c an a p u sa n dG U S g e n ew e r ec o n

13、n e c t e db yt h r o m b i nw i t hs i xa m i n o a c i d s ，f o r m i n g af u s i o n p r o t e i n ．T h ef u s i o n p r o t e i ng e n e h a s ac o d i n g r e g i o n o f 2 4 1 5b a s ep a i r s e n c o d i n g 8 0

14、 4a m i n oa c i d s a n dat e r m i n a t o r c o d e ．T h e s o t t w a r eo fp r o t e i na n a l y s i s( A n t h e p r o t ．5 ．0 ) W a Su s e d ，a n dr e s u l t s s h o w e dt h a t t h e f u s i o n p r o t e i nk

15、 e e p sp h v s i c a l a n dc h e m i c a lc h a r a c t e r s a sg o o d a st h eo r i g i n a lt w o p r o t e i n s ，a n dm a i n t a i n e d t h ee s s e n t i a ls e c o r l d a r ys t r u c t u r e so f t h r e ep

16、 r o t e i n s ．B yc l o n i n gt h ef u s i o ng e n et o v e c t o rp U C l 2 1 ，t h ei n t e r m e d i a t ev e c t o r p U C O T S G U S w a s c o n s t r u c t e d ．3 · C o n s t r u c t i o no f p l a n t e x

17、p r e s s i o n v e c t o rT h ep l a n te x p r e s s i o nv e c t o r sp B l 3 5 S O T S l 2 1 ，p B I L e a O T S l 2 1a n dp B I N a p i n l 2 1 d r o v er e s p e c t i v e l yb y C a M V 3 5 S ，L e a a n d N a p i n