果樹單染色體及其R基因同源序列的分離與克隆.pdf

1、果樹是一類經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高的園藝作物,然而由于其自身的一些特點(diǎn),使其遺傳研究難度很大,基因組研究更是處于落后狀態(tài).中國(guó)是多種重要果樹的起源中心,擁有十分豐富的果樹種質(zhì)資源,而在果樹基因組研究方面卻剛剛起步.為此,該研究選擇一些具有中國(guó)特色的果樹種,擬將近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的染色體微分離微克隆和同源序列擴(kuò)增兩項(xiàng)新技術(shù)引入果樹基因組研究,探討它們?cè)诠麡涞幕蚪M研究中的可行性和應(yīng)用價(jià)值.該研究選用典型小染色體的現(xiàn)代果樹種柚和相對(duì)大染色體的古老果樹種銀杏

2、為材料,從染色體標(biāo)本的制備、微細(xì)玻璃針的制作、單染色體的顯微分離等方面進(jìn)行了探索,建立了一套有效的木本果樹染色體顯微分離技術(shù)體系.在此基礎(chǔ)上,對(duì)分離的單染色體DNA進(jìn)行了體外擴(kuò)增,并對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行克隆,構(gòu)建了單染色體DNA的質(zhì)粒文庫(kù).根據(jù)已知植物抗病(R)基因的保守結(jié)構(gòu)域設(shè)計(jì)特異簡(jiǎn)并引物,從柚和銀杏的基因組DNA以及柚的花柱cDNA中對(duì)R基因同源序列(RGA)進(jìn)行擴(kuò)增和克隆,在此基礎(chǔ)上,結(jié)合染色體顯微分離技術(shù),從單條染色體DNA及其擴(kuò)增