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文檔簡介
1、本實驗選用水稻花藥愈傷組織作為轉(zhuǎn)化的受體,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將已克隆的具有水稻白葉枯病廣譜抗性的基因,Xa21,導(dǎo)入臺北309、日本晴、中花11、中花9四個品種中?;ㄋ幱鷤M織對其四種品種誘導(dǎo)分析,本實驗共獲得31株綠苗,其中臺北309有14株,日本晴為13株,中花11為1株,中花9為3株。對25株植株經(jīng)過形態(tài)觀察,染色體計數(shù),F(xiàn)ISH三種方法綜合鑒定。對T0代中28株再生植株進(jìn)行了PCR檢測。有24株驗證為陰性。對PCR檢測呈陽性的
2、15株再生植株做Southern檢測。分別用限制性內(nèi)切酶EcoRⅤ和Hind III進(jìn)行酶切。經(jīng)檢測證明外源DNA已經(jīng)整合到這15株再生植株的基因組中。挑選出2個經(jīng)PCR和Southern驗證為陽性的臺北309的單倍體再生植株,用其根尖細(xì)胞染色體作熒光原位雜交。雜交信號分別出現(xiàn)在一個單倍體的1號染色體上和另一個單倍體的2號染色體上,顯示出外源基因片段的插入位點。對23株T0代再生植株接水稻白葉枯菌P6小種后進(jìn)行田間抗性檢測。其中有19
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