水環(huán)境耐藥細(xì)菌中qnr基因、ISCR1元件和新型dfr基因的研究.pdf

1、隨著醫(yī)療水平的不斷提升與進(jìn)步，種類繁多的抗生素日益被開發(fā)出來并投放到市場之中，但是抗生素的大量使用以及濫用，造成環(huán)境中抗生素的大量殘留，使細(xì)菌的耐藥率不斷攀升，“超級(jí)細(xì)菌”的出現(xiàn)給我們敲響了警鐘，現(xiàn)在新藥物的研發(fā)速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)趕不上細(xì)菌耐藥性產(chǎn)生及傳播速度，細(xì)菌耐藥性尤其是多重耐藥性已經(jīng)對(duì)人類的健康構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅，成為了全球性問題，同時(shí)也成為了全球關(guān)注和研究的熱點(diǎn)內(nèi)容。
　　 喹諾酮類抗菌藥物從早期主要用于治療尿道感染發(fā)展到治療腸道

2、感染和呼吸道感染，目前已在臨床、畜牧業(yè)和水產(chǎn)業(yè)中廣泛使用，細(xì)菌對(duì)其耐藥性也逐漸呈蔓延趨勢(shì)，耐藥機(jī)制日趨復(fù)雜。喹諾酮類耐藥機(jī)制主要分為染色體介導(dǎo)的耐藥和質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥，后者對(duì)細(xì)菌耐藥性的廣泛傳播起著重要作用。1998年首次報(bào)道了質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮類耐藥機(jī)制，即質(zhì)粒上qnr基因介導(dǎo)的細(xì)菌對(duì)氟喹諾酮耐藥機(jī)制，qnr基因可在不同細(xì)菌中迅速水平傳播，引發(fā)的感染不易控制，使得院內(nèi)感染大范圍的流行。以往的研究表明，qnrA，qnrB通常位于含ISCR1

3、元件的復(fù)雜Ⅰ型整合子下游，qnrS則尚未發(fā)現(xiàn)存在于整合子上，ISCR元件作為一種新的基因捕獲系統(tǒng)，它可以移動(dòng)鄰近的任何DNA序列，為耐藥基因在不同菌屬間的水平傳播提供了高效媒介。因此qnr基因常與氨基糖苷類、甲氧芐啶及氯霉素等多數(shù)位于ISCR1元件上游Ⅰ型整合子中的耐藥基因盒相關(guān)，此外，qnr基因通常與β-內(nèi)酰胺類耐藥基因相關(guān)。qnr基因存在于復(fù)雜整合子中并與其他多種耐藥基因的共同整合，縮小了臨床醫(yī)生治療相關(guān)細(xì)菌感染時(shí)選藥或聯(lián)合用藥的空

4、間，給我們帶來了嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。
　　 本課題主要研究濟(jì)南地區(qū)水環(huán)境中細(xì)菌耐藥性情況，以及耐藥基因qnr的分布，評(píng)估抗生素污染對(duì)對(duì)生態(tài)環(huán)境造成的影響，發(fā)現(xiàn)環(huán)境中新的耐藥機(jī)制，研究細(xì)菌基因移動(dòng)元件ISCR1，發(fā)現(xiàn)基因水平轉(zhuǎn)移的一些新規(guī)律，并對(duì)發(fā)現(xiàn)的新型耐藥基因進(jìn)行克隆表達(dá)和蛋白純化以及后續(xù)分析。希望我們的研究結(jié)果能對(duì)控制日益嚴(yán)重的抗生素耐藥性及其傳播提供參考，對(duì)治療相關(guān)細(xì)菌感染時(shí)的選藥或聯(lián)合用藥提供一定的理論依據(jù)，以及對(duì)藥物研發(fā)提供新

5、靶點(diǎn)。
　　 本實(shí)驗(yàn)在從濟(jì)南地區(qū)醫(yī)院廢水環(huán)境和生活廢水環(huán)境水樣中分離篩選出來的391株耐藥革蘭氏陰性菌中，篩選到31株含有qnr基因的菌株和41株含有ISCR1元件的菌株，并進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行菌屬歸類和抗菌藥物敏感性分析，發(fā)現(xiàn)它們主要分布在10個(gè)菌屬中，對(duì)qnr基因進(jìn)行分型共發(fā)現(xiàn)了qnrA1、qnrB2，qnrB4，qnrB6，qnrB9，qnrS1六種常規(guī)變體以及qnrB26一種新變體，另外兩種質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮耐藥基因aac(6'