29365.芽孢型益生菌黏膜疫苗平臺的構(gòu)建與生物學(xué)特性研究

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文芽孢型益生菌黏膜疫苗平臺的構(gòu)建與生物學(xué)特性研究姓名：李麗申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：病原生物學(xué)指導(dǎo)教師：余新炳20090928中山大學(xué)博十學(xué)位論文芽孢型益生菌粘膜疫苗平臺的構(gòu)建與生物學(xué)特性研究構(gòu)建表達體系：在芽孢外表面展示(與芽孢CotB或CotC外殼蛋白融合表達)；在芽孢萌發(fā)為繁殖體中的表達；以及芽孢與繁殖體雙轉(zhuǎn)構(gòu)建相結(jié)合的方式表達。熒光免疫學(xué)實驗、激光共聚焦顯微鏡檢測到外源蛋白在芽孢外表面成功地表達，同時也證明了多價

2、重組抗原的大分子結(jié)構(gòu)不影響芽孢外層蛋白的組裝和芽孢形成。本文還評估了芽孢的免疫佐劑效應(yīng)。我們利用分子信息學(xué)進行分析并用實驗方法檢測了芽孢桿菌不同種屬的物理化學(xué)特性，選擇枯草芽孢桿菌PY79，HU58和克勞氏芽孢桿菌O／C作為非重組芽孢蛋白疫苗的載體與蛋白混合，證實了芽孢對蛋白的吸附作用，用吸附蛋白的芽孢滴鼻免疫小鼠能引起強烈的黏膜免疫反應(yīng)，在肺組織、糞便、唾液中均能檢測到高水平的Sj26GST特異性slgA的分泌。同時，也能激發(fā)小鼠系統(tǒng)

3、免疫反應(yīng)，IgG亞類提示為以Thl占主導(dǎo)的Thl／Th2混合型免疫反應(yīng)。利用此免疫反應(yīng)誘導(dǎo)的均衡Thl和Th2反應(yīng)，有利于提升日本血吸蟲免疫保護作用。證實了芽孢作為新型黏膜疫苗佐劑，能提高機體特異性和非特異性免疫水平，能調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)類型。非重組芽孢蛋白疫苗免疫效果較重組芽孢更佳，但由于其吸附的抗原蛋白不能通過胃屏障，只能以滴鼻形式免疫而使其應(yīng)用受到一定限制。本文通過構(gòu)建多種芽孢疫苗技術(shù)平臺，實現(xiàn)了外源蛋白在重組枯草桿菌的芽孢衣殼展示和繁

4、殖體的雙功能表達，并使用不同的黏膜免疫方式進行了免疫學(xué)評價。研究表明，最有效的重組芽孢疫苗接種策略是芽孢表面與營養(yǎng)繁殖體細胞中的雙轉(zhuǎn)表達，使用三次劑量足以刺激小鼠產(chǎn)生Sj26GST特異性免疫反應(yīng)。此外，對于非重組芽孢蛋白疫苗，滴鼻免疫是最佳接種方式，小劑量的接種能引起強烈地特異性地系統(tǒng)、黏膜免疫反應(yīng)和細胞免疫反應(yīng)。本文構(gòu)建的多種形式的益生菌芽孢黏膜疫苗平臺和免疫學(xué)評價體系，為芽孢桿菌表達系統(tǒng)提供了應(yīng)用指導(dǎo)，為研發(fā)高效的第二代抗日本血吸蟲