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1、VS5913ZL^,分類號(hào)盟i£翌四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文一株菲醌類光敏劑產(chǎn)生菌ALl8的cDNA文庫(kù)的構(gòu)建張亞南指導(dǎo)教師曾憲垠研究員學(xué)科專業(yè)研究方向張紅雨教授(山東理工大學(xué))生物物理學(xué)分子生物物理2006年6月ConstructionofcDNALibraryofaFungusProducingPerylenequinonoidDerivativesPhotosensitizerZhangYa—nan(Biophysics)Direc
2、tedbyProfZengXianyinandProfZhangHongyuThisworkusesafimgusALl8producingPerylenequinonoidderivativesphotosensitizerwhichwaspickedfromthemountainousareaatthewesternpartofYunnanOnthebasisofestablishingthemethodoftotalRNAextr
3、action,theeDNAlibraryiSconstructedThemainresultsareasfollows:1InordertogetovertheproblemthatRNAiseasytOdegradeandtherearealotofRNaseandglucideinthisfungusOnthebasisofconsultingmanymethodsoftotalRNAextraction,themethodise
4、stablishedbyexperimentfortotalRNAextractionusingguanidiniumisothiocyanteandDmercaptoethanolfordenaturation,thenusingwater—saturedphenol,chloroformandisoamylalcoholeforextraction,RNAstayinwater,whileDNAandproteinstayinano
5、thermediumFinally,RNAisdepositedbyisopropyIaIcoho】TheintegrityandpurificationofthetotalRNAisolatedareeligibleandmeettherequirementtoconstructeDNAlibrary2ThecDNAissynthesizedfromthetotalRNAwiththeonepointmutantofMoloneymu
6、rineleukemiavirus(MMLV)reversetranscriptase,andtheeDNAisfurthersize—fractionedbyCHROMASPIN一400Columntoremovethefractionshorterthan500bpThedscDNAisclonedintotheATriplEx2vectorandtheresultingligatingmatarialiskphagepackage
7、dTheunamplifedcDNAlibraryistiteredusingEcoliXL—Blue,anditturnsoutthatthetiteroftheeDNAlibraryisl04x106pfu/ml,thetiteroftheamplifiedcDNAlibraryisl32x10”pfu/ml,andtherecombinantefficiencyis82%throughwhite/bluescreeningItis
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