26768.人微小rna轉錄組分析及細胞定位研究

1、中山大學博士學位論文人微小RNA轉錄組分析及細胞定位研究姓名：廖建友申請學位級別：博士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：屈良鵠20100608廖建友中山大學博十學位論文2010進入細胞核中。對各種miRNA在細胞核和細胞質(zhì)中的表達水平分析發(fā)現(xiàn)不同miRNA在58F細胞的細胞核中的富集程度不同。以前的研究發(fā)現(xiàn)miR29b的3’末端六核苷酸“AGUGUU“是一個入核信號，能介導miR29b在細胞核中的富集。與此發(fā)現(xiàn)相一致的是，本研究也發(fā)現(xiàn)

2、miR29b在細胞核內(nèi)富集，本研究同時還發(fā)現(xiàn)有一些miRNA有著和miR29b相似的核富集程度。盡管如此，這些核富集miRNA間并沒有一個保守的3’末端序列。為了尋找更多的入核信號，本研究進一步分析了所有miRNA3’末端序列和miRNA富集程度間的聯(lián)系，分析結果顯示它們之間沒有明顯聯(lián)系，這說明miRNA間并沒有一個保守的入核信號能介導它們在細胞核中的富集。對人58F細胞核和細胞質(zhì)微小RNA轉錄組的分析還發(fā)現(xiàn)大量的tRNA3’尾巴被從細

3、胞核運到了細胞質(zhì)并在細胞質(zhì)中積累。此外，本研究在正常人類細胞中和其它物種的細胞中也發(fā)現(xiàn)各種tRNA3’尾巴的積累，這說明tRNA3’尾巴在細胞中的積累是一個保守的現(xiàn)象。tRNA3’尾巴是tRNA在加工成熟過程中產(chǎn)生的一個加工副產(chǎn)物，它在產(chǎn)生后一度被認為會在細胞核中被降解掉。本研究的發(fā)現(xiàn)說明tRNA3’尾巴可能不是一種無功能的加工副產(chǎn)物，而是一種功能性微小RNA。本研究還利用細胞核和細胞質(zhì)小RNA的大規(guī)模測序數(shù)據(jù)來預測新的miRNA基因，

4、最終本研究預測出了26個可信度較高的miRNA基因，其中包括一個保守的miRNA和一個mirtron。本研究鑒定了一個由線粒體輕鏈復制起始位點編碼的微小RNA，該微小RNA具有與tRNAL型三維結構中由T1lrC環(huán)和接收臂堆疊而成的結構域(tIⅢA小螺旋結構域)一樣的結構特征，即能它形成一個莖長為12個堿基對的發(fā)卡結構，具有鑒別堿基，它的3’末端含有轉錄后加上的CCA。已有許多研究表明與tRNA小螺旋結構域結構一樣的人工合成的RNA小螺

5、旋(稱為tRNA小螺旋)在體外具有許多tRNA的性質(zhì)，比如能被氨酰化。同樣，實驗證明本研究發(fā)現(xiàn)的這個線粒體輕鏈復制起始位點編碼的微小RNA也能被氨?；Ｒ虼?，tplsRNA是目前為止發(fā)現(xiàn)的第一個內(nèi)源性tRNA小螺旋。由于許多研究認為現(xiàn)代tRNA的祖先的結構可能跟tRNA小螺旋結構域一樣，因此本研究將該微小RNA命名為類似tRNA祖先的微小RNA(tRNAprogenitorlikesmallRNAtplsRNA)。關鍵詞：微小RNA，細