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文檔簡介
1、華中科技大學碩士學位論文基于全基因合成技術的南極假絲酵母脂肪酶B基因的密碼子優(yōu)化研究姓名:劉立營申請學位級別:碩士專業(yè):微生物學指導教師:楊江科20110121II華中科中科技大學碩士學位論大學碩士學位論文CalBMHis10個重組表達質(zhì)粒,并分別轉(zhuǎn)至P.pastisGS115、SMD1168和X33,實現(xiàn)了各基因在宿主菌中的功能性表達,獲得了高效表達的基因工程菌。結(jié)果表明,密碼子優(yōu)化明顯提高了CalB在P.pastis中的水解酶活與蛋
2、白表達量,較原始基因提高40%了左右。以pPICZα為表達載體,X33為宿主菌株篩選到的轉(zhuǎn)化子表達水平最高,最高辛酸乙酯水解活力和最高總蛋白表達量分別為246.3UmL和179.1mgL。5.4.對經(jīng)NiNTA親和層析和超濾濃縮純化的CALB進行SDSPAGE分析,發(fā)現(xiàn)在CalB基因在P.pastis中表達產(chǎn)物的大小為35kDa(含糖基化側(cè)鏈)。經(jīng)EndoH糖苷內(nèi)切酶酶切的CALB約為33kDa,與實際CALB大小一致,證實了CALB在
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