黑曲霉提取物與水楊酸對長春花懸浮細胞生長及生物堿代謝作用的研究.pdf

1、在植物細胞培養(yǎng)過程中,添加誘導子是提高植物次生代謝有效的方法之一.該文以黑曲霉提取物和水楊酸作為誘導子就長春花細胞懸浮培養(yǎng)過程中誘導子與其相互作用關系及誘導子對生物堿代謝的影響等方面進行初步探討,研究結果如下:毛霉、木霉、青霉、黑曲霉及酵母提取物5種真菌誘導子處理均能提高長春花懸浮培養(yǎng)細胞中生物堿的含量.在長春花懸浮培養(yǎng)細胞對數(shù)生長末期加入濃度為300μg/mL黑曲霉誘導子,生物堿含量達到了666μg/gFW,是對照的1.6倍.真菌誘導

2、子能激發(fā)長春花懸浮培養(yǎng)細胞的防御性應答反應.產(chǎn)生氧進發(fā),細胞的氧化還原態(tài)勢發(fā)生了明顯的變化,培養(yǎng)基發(fā)生堿化現(xiàn)象,膜脂過氧化產(chǎn)物MDA含量大幅提高,蛋白質(zhì)含量提高,POD、CAT的活力出現(xiàn)波動性變化,并具有一定的時序性.同時,與生物堿代謝有關的PAL的活力得到提高.真菌誘導后加入200mmol/L氯化鈣能夠加強誘導子的誘導效果,生物堿含量進一步提高,達到730μg/gFW;而10mmol/L EGTA和1mmol/L LaCl<,3>抑制

3、真菌誘導子的誘導效果,對生物堿含量沒有影響.通過添加不同濃度的水楊酸(SA),比較它們對長春花細胞POD、PAL、H<,2>O<,2>含量及對細胞生長和生物堿含量的影響,結果表明,SA可提高POD及PAL的活性,促進細胞內(nèi)H<,2>O<,2>含量的上升并有利于生物堿的合成,其中10mg/L水楊酸對生物堿合成的促進效果明顯,生物堿含量為對照組的1.3倍.經(jīng)過300μg/mL黑曲霉誘導子(F0),10mg/L水楊酸(SA),300μg/mL

4、黑曲霉誘導子十10mg/L SA 3種處理,對長春花懸浮細胞膜脂過氧化和生物堿合成的影響.結果表明:F0和SA單獨處理細胞均引起長春花細胞膜脂過氧化.SA十F0聯(lián)合處理可以減輕F0單獨處理細胞所引起的膜脂過氧化程度.SA十F0聯(lián)合處理與真菌誘導子處理相比,較大地提高了過氧化物酶及苯丙氨酸解氨酶的活性.3種處理方法均可提高長春花細胞生物堿含量,特別以F0十SA處理含量最高,達到700μg/gFW.結果顯示:在真菌誘導子誘導與水揚酸的聯(lián)合作