17215.凡納濱對蝦血藍蛋白抗腫瘤活性及其功能多樣性的糖分子基礎(chǔ)研究

1、I摘要對蝦血藍蛋白是近年來發(fā)現(xiàn)的一種與對蝦免疫防御有關(guān)的多功能蛋白，其具有酚氧化酶活性、抗病毒、抗細菌、凝集、溶血等多種非特異性免疫學活性。然而迄今為止，其是否具有抗腫瘤活性尚不清楚，同時其功能多樣性的糖分子基礎(chǔ)還有待于進一步深入研究。為此，本研究在探索對蝦血藍蛋白抗腫瘤活性及其分子作用機制的基礎(chǔ)之上，對其功能多樣性的糖分子基礎(chǔ)進行了較深入的研究，所獲研究結(jié)果具體如下：1、對蝦血藍蛋白抗腫瘤活性及其分子機制研究首先，采用SRB和MTT兩

2、種方法探索對蝦血藍蛋白對Hela細胞的抗腫瘤活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，1050μgmL藍蛋白處理Hela細胞48h后，血藍蛋白對Hela細胞的抑制率56.8771.35％，而對正常的293T細胞無抑制活性，且對腫瘤細胞的抑制活性隨著血藍蛋白濃度的上升，對Hela細胞的抑制率逐漸提高，呈明顯的濃度劑量效應(yīng)，由此說明，對蝦血藍蛋白具有抗腫瘤活性。繼而，采用顯微鏡觀察和Dapi染色技術(shù)分析血藍蛋白對Hela細胞和正常細胞形態(tài)和細胞核的影響，結(jié)果表明，血

3、藍蛋白能夠使Hela細胞皺縮、變圓并產(chǎn)生類似陽性對照的凋亡小體，而對正常的293T細胞沒有影響。提示，血藍蛋白可能誘導了Hela細胞的凋亡。接著，采用細胞免疫熒光和DNAladder實驗技術(shù)分析血藍蛋白與Hela細胞的相互作用以及血藍蛋白對Hela細胞核基因組的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，血藍蛋白能夠與細胞膜相互結(jié)合并（或者）能進入細胞內(nèi)部，并能使細胞核基因組在100bp和300bp左右產(chǎn)生梯狀條帶，進一步表明血藍蛋白可能誘導了Hela細胞的凋亡。

4、然后，我們采用蛋白質(zhì)組學的策略鑒定對蝦血藍蛋白作用Hela細胞后主要變化蛋白。結(jié)果顯示，與對照組相比，17個蛋白點表達水平發(fā)生明顯的變化，其中11個蛋白表達上調(diào)，6個蛋白表達下調(diào)，經(jīng)MALDITOFTOFMS分析和Mot搜索蛋白點1、3、4、5、8、11、13、15、16、17等10個顯著差異的蛋白點分別鑒定為Edar相關(guān)死亡受體、Hsp60變體、Hsp70前體、YWHAZ蛋白和GTP結(jié)合蛋白Ran等蛋白點，說明這些蛋白可能與Hela細