16553.家蠅外切多聚磷酸酶(ppx)片段基因的克隆及原核表達(dá)載體構(gòu)建

1、1中國(guó)圖書分類號(hào):Q7單位代碼：10660學(xué)號(hào)：S100039貴陽醫(yī)學(xué)院貴陽醫(yī)學(xué)院20132013碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文家蠅家蠅外切多聚磷酸酶外切多聚磷酸酶(PPX)(PPX)片段基因的克隆片段基因的克隆及原核表達(dá)載體構(gòu)建及原核表達(dá)載體構(gòu)建研究生：楊虓導(dǎo)師：張春林（教授）吳建偉（教授）年級(jí)：2010級(jí)專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)2013年03月09日3家蠅外切多聚磷酸酶家蠅外切多聚磷酸酶(PPX)(PPX)片段基因的克隆及原核表達(dá)載體構(gòu)建片段基因

2、的克隆及原核表達(dá)載體構(gòu)建專業(yè)名稱：細(xì)胞生物學(xué)研究生：楊虓導(dǎo)師：張春林教授吳建偉教授摘要：目的：摘要：目的：克隆家蠅外切多聚磷酸酶（PPX）片段基因的cDNA序列，并對(duì)PPX基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析，構(gòu)建該基因的原核表達(dá)載體。方法：方法：根據(jù)已知抗菌肽N端氨基酸序列設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物，采用3’race技術(shù)對(duì)其進(jìn)行序列延伸；根據(jù)3’race結(jié)果設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增家蠅PPX基因序列并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析，構(gòu)建家蠅PPX基因重組原核表達(dá)質(zhì)粒并鑒定。結(jié)果：

3、結(jié)果：家蠅PPX基因的cDNA長(zhǎng)660bp，編碼219個(gè)氨基酸。生物信息學(xué)分析顯示家蠅PPX是一個(gè)分子量24.7867kD，等電點(diǎn)為8.4，不穩(wěn)定參數(shù)45.58，脂溶指數(shù)99.27，不具跨膜區(qū)和信號(hào)肽的親水蛋白。其主要構(gòu)成元件為α螺旋、β折疊和無規(guī)則卷曲及少部分的β轉(zhuǎn)角。三維結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)顯示該蛋白高度復(fù)雜卷曲。系統(tǒng)同源性分析顯示PPX基因在進(jìn)化過程中高度保守。根據(jù)克隆的家蠅PPX基因成功構(gòu)建PPX基因的原核表達(dá)載體，獲得融合組氨酸（HIS）