16034.玉米轉(zhuǎn)錄因子zmwrky58基因的克隆及其抗逆功能研究

1、I摘要干旱、高鹽是影響植物正常生長發(fā)育和產(chǎn)量品質(zhì)的主要非生物脅迫因素。研究植物的逆境應(yīng)答機制，培育抗逆性較強的作物新品種具有重要意義。近些年的研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)錄因子在植物的生長發(fā)育及其應(yīng)答脅迫信號途徑方面起著非常重要的作用。WRKY基因家族是目前研究比較熱門的逆境相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子之一，其家族成員廣泛地參與植物對環(huán)境脅迫的應(yīng)答反應(yīng)、植物的生長發(fā)育、代謝調(diào)控等一系列生理活動。本研究從玉米自交系B73中克隆得到ZmWRKY58基因，并對其在抗逆方面的

2、功能進(jìn)行了初步分析。獲得如下主要研究結(jié)果：1.通過RTPCR方法分析干旱、高鹽處理下ZmWRKY58基因在玉米中的內(nèi)源表達(dá)情況。結(jié)果顯示ZmWRKY58基因受干旱、高鹽脅迫誘導(dǎo)表達(dá)。2.采用PCR方法克隆得到ZmWRKY58基因。生物信息學(xué)分析表明：該基因編碼區(qū)全長1110bp，編碼369個氨基酸。預(yù)測編碼蛋白的相對分子質(zhì)量為39.4kD，等電點為9.81。其序列中含有1個高度保守的WRKY結(jié)構(gòu)域，鋅指結(jié)構(gòu)域為典型的C2H2型。3.構(gòu)建

3、了融合表達(dá)載體P1302ZmWRKY58，采用基因槍法轟擊洋蔥表皮細(xì)胞進(jìn)行亞細(xì)胞定位分析，結(jié)果顯示ZmWRKY58與GFP的融合蛋白定位于細(xì)胞核中。4.構(gòu)建了植物過表達(dá)載體CPBZmWRKY58和雙鏈RNAi載體CPB2ZmWRKY58i。采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法將CPBZmWRKY58轉(zhuǎn)化水稻，獲得了5顆T0代轉(zhuǎn)基因水稻植株，通過PCR的方法進(jìn)行篩選得到T3代純合株系L12、L13、L45。5.對轉(zhuǎn)基因水稻純系植株和對照植株進(jìn)行抗非生物逆