13890.利用植物油體蛋白系統(tǒng)表達(dá)神經(jīng)保護肽humanin的研究

1、分類號Q2墨墨●UDC602學(xué)校代碼!壘塑三學(xué)校亡蘑太堂密級公玨彥商大學(xué)學(xué)位論文劐用植物油馇蛋自丕統(tǒng)麥鯊袖經(jīng)堡控魃H些墮魚凸i旦的硒究專業(yè)名稱佳塑越蟄堂皇趲佳堂學(xué)院名稱壅堂院指導(dǎo)教師圃凰廷副塾拯申請學(xué)位級別亟論文提交日期圣Q!圣生墨旦論文答辯日期窒Q!圣生墨旦學(xué)位授予日期星Q!墨生魚月廣西大學(xué)碩士掌位論文利用植物油體蛋白系統(tǒng)表達(dá)神經(jīng)保護肽Humanin的研究利用植物油體蛋白系統(tǒng)表達(dá)神經(jīng)保護肽Humanin的研究摘要阿爾茨海默病(Alzh

2、eimersdisease，AD)是一種在老年人中常見的疾病，常伴有記憶力減退、遲鈍、癡呆等癥狀，其發(fā)病率和人口的老齡化成正比。此病嚴(yán)重影響了患者的正常生活，是于癌癥、中風(fēng)和心腦血管疾病之后的又一類危害人類健康的重大疾病。Humanin蛋白對AD有關(guān)基因突變引起的細(xì)胞損傷具有保護作用，后來的研究認(rèn)為，Humanin還具有更廣泛的藥用價值，是一種重要的藥用蛋白，市場需求潛力巨大。植物生物反應(yīng)器是生產(chǎn)外源蛋白的有效方法，具有生產(chǎn)成本低，安全

3、性高等特點，人們已經(jīng)利用植物生物反應(yīng)器成功表達(dá)了酶和抗體等多種外源蛋白。作為生物反應(yīng)器的一種，植物油體蛋白系統(tǒng)能夠在種子中高水平表達(dá)外源蛋白，具有親水親脂雙重特性，其中部疏水區(qū)高度保守，呈發(fā)夾結(jié)構(gòu)鑲嵌在油體的內(nèi)部，決定了在油體上的定位，而兩端堿基序列差異比較大，故外源蛋白插入其任何一端都對其在油體上的定位毫無影響，最重要的是融合蛋白容易分離純化。本研究利用花生油體蛋白系統(tǒng)表達(dá)Humanin蛋白，尋求新的植物生物反應(yīng)器載體、優(yōu)化表達(dá)條件，

4、對農(nóng)學(xué)、基因工程和生物制藥的研究具有重要意義。本研究初步建立了花生油體蛋白(oleosin)系統(tǒng)表達(dá)Humanin的技術(shù)體系，并在煙草種子中表達(dá)了Humanin蛋白，為在花生中生產(chǎn)Humanin蛋白奠定了基礎(chǔ)。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下：Humanin基因的合成：設(shè)計并合成部分互補的兩條單鏈DNA引物(分別帶有相應(yīng)的酶切位點和修飾序列)，經(jīng)克隆測序得到Humanin基因的正確克隆。植物表達(dá)載體的構(gòu)建：將Humanin基因連接在花生oleos

5、in基因的3’端，中間以腸肽酶編碼序列連接，分別以35S組成型啟動子和花生oleosin啟動子驅(qū)動表達(dá)，構(gòu)建了pCAMBIA2300oleopromoterAholeosinHumanin和pCAMBIA2300—35S—AholeosinHumanin植物表達(dá)載體；將oleopromoterAholeosinHumanin表達(dá)單元構(gòu)建到含有GUS的pCAMBIAl301載體中，得到了植物表達(dá)載體pCAMBIAl301oleopromo