13452.stat5b介導生長激素調控雞igfi基因表達的研究

1、碩士學位論文論文題目STAT5b介導生長激素調控雞IGFI基因表達的研究研究生姓名王慧娟指導教師姓名顧志良專業(yè)名稱遺傳學研究方向動物分子遺傳學論文提交日期2013年4月STAT5b介導生長激素調控雞IGFI基因表達的研究中文摘要I中文摘要生長軸是動物體內從下丘腦垂體靶器官的一系列激素及其受體所組成的神經內分泌系統(tǒng)。生長激素(GH)通過IGFI介導調節(jié)動物生長和細胞分化，通過提高生長軸中GH和IGFI水平，促進增重、提高飼料轉化率和改善肉

2、品質，是畜禽生長調控的一種新途徑。GH可以通過STAT5b的介導促進哺乳動物IGFI基因的表達，本研究首先通過實時熒光定量PCR發(fā)現GH可以促進雞原代肝細胞IGFI基因表達的上調，然后通過生物信息學、分子克隆技術、體外細胞共轉染實驗、雙熒光素酶報告基因檢測實驗和ChIP技術等研究了雞IGFI基因及其上下游側翼序列上起增強子作用的STAT5b結合位點，試圖弄清GH調控雞的IGFI基因表達的分子機理。主要研究結果如下：(1)為了研究雞肝臟中

3、表達的IGFI基因在離體條件下受GH調控的mRNA表達情況，以3～4周齡雌性商品代AA肉雞為實驗材料，采用改良的半原位兩步灌流法并結合消化法分離肝細胞，進行原代培養(yǎng)；采用熒光定量PCR的方法，檢測GH處理12h后IGFImRNA表達情況。結果表明：膠原酶消化法所獲得的肝細胞分離良好，形態(tài)完整，鋪板4h即貼壁，繼續(xù)培養(yǎng)24h即可用于GH處理實驗；GH能夠引起雞肝細胞中IGFImRNA表達的上調。(2)為了弄清楚GH促進雞IGFImRNA表

4、達上調是否通過STAT5b介導，首先利用生物信息學和VISTA程序對雞IGFI基因(NW_001471513)及其上下游側翼端的STAT5b結合位點進行分析。結果發(fā)現：在雞IGFI基因約50kb和其5側翼序列約40kb以及其3側翼序列約10kb共約100kb序列上共含有57個STAT5b結合位點，按其順序被命名為S1～n；TTCNNNGAA是人、小鼠、大鼠等物種保守的STAT5b結合位點的共有序列；與小鼠等其他哺乳動物相比，并沒有保守的