13147.地鱉蟲(chóng)和黃粉蟲(chóng)纖溶活性蛋白的分離純化、性質(zhì)研究及其基因克隆

1、分類(lèi)號(hào)：UDC：密級(jí)：學(xué)校代號(hào)：11845學(xué)號(hào)：1120806002廣東工業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文(工學(xué)博士)地鱉蟲(chóng)和黃粉蟲(chóng)纖溶活性蛋白的分離純化、性質(zhì)研究及其基因克隆黃明星指導(dǎo)教師姓名、職稱(chēng)：瑩雅菹教授企業(yè)導(dǎo)師姓名、職稱(chēng)：無(wú)專(zhuān)業(yè)或領(lǐng)域名稱(chēng)：廑且化堂學(xué)生所屬學(xué)院：輕工化工堂院論文答辯日期：2Q12生12且2Q目摘要地鱉蟲(chóng)(Eupolyphagesinensis)，又名土鱉蟲(chóng)、土元等，昆蟲(chóng)綱(Hexapeda)蜚蠊目(Blattada)鱉蠊科(

2、Corydiidae)蟲(chóng)，為《中華人民共和國(guó)藥典》記載的正品藥材。地鱉蟲(chóng)在中藥中被使用具有悠久歷史，中國(guó)明代李時(shí)珍的《本草綱目》，東漢著名醫(yī)學(xué)家張仲景的《金匱要略》和漢代的藥物著作《神農(nóng)本草經(jīng)》等均有記載。地鱉蟲(chóng)歷來(lái)都做為傳統(tǒng)的活血化瘀類(lèi)動(dòng)物藥，現(xiàn)代生化分子及藥理試驗(yàn)也證明了地鱉蟲(chóng)具有抗凝血、抗腫瘤、抑制血小板聚集、溶解靜脈血栓等藥效。黃粉蟲(chóng)(Tenebriomolitor)俗稱(chēng)黃粉甲、面包蟲(chóng)，屬于昆蟲(chóng)綱(Insect)，鞘翅目(Col

3、eopter)，擬步甲科(Tenebrionide)粉甲屬(Tenebrionini)，原產(chǎn)于南美洲，屬于倉(cāng)庫(kù)和貯藏害蟲(chóng)。因其營(yíng)養(yǎng)成分高，營(yíng)養(yǎng)含量居各類(lèi)活體動(dòng)物蛋白飼料之首，被譽(yù)為“蛋白質(zhì)飼料寶庫(kù)“。近年來(lái)，黃粉蟲(chóng)被逐步開(kāi)發(fā)為寵物飼料，以及應(yīng)用于人類(lèi)的高級(jí)營(yíng)養(yǎng)食品。地鱉蟲(chóng)和黃粉蟲(chóng)體內(nèi)不僅含有豐富的蛋白質(zhì)、脂肪、氨基酸和其它小分子次生代謝物，同時(shí)還含有豐富的纖維蛋白溶解酶類(lèi)，分離純化這些纖溶活性蛋白并研究它們的性質(zhì)對(duì)開(kāi)發(fā)新型溶栓藥物具有重

4、要的意義。本文首先研究了纖溶活性蛋白的檢測(cè)方法：纖維平板法(fibrinplatemethod)和纖維蛋白酶譜法(fibrinzymography)。其中，纖維平板法可以用來(lái)快速地定性和半定量檢測(cè)纖溶活性蛋白。本文對(duì)該方法中的幾個(gè)關(guān)鍵因素做了詳細(xì)的研究和探討。纖維蛋白酶譜法是一種基于SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)的方法，我們通過(guò)對(duì)該方法中幾個(gè)關(guān)鍵因素的研究和討論，得到了一種有效而簡(jiǎn)便的方法，可以讓蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)的深藍(lán)色條帶和纖溶蛋白激活物

5、的透明裂解帶同時(shí)在淡藍(lán)色的背景下顯示出來(lái)。此方法能快速的檢測(cè)出未知樣品中纖溶活性蛋白的種類(lèi)、數(shù)量和分子量，從而為后期的純化提供更有價(jià)值的信息。其次，我們從地鱉蟲(chóng)體內(nèi)分離純化出了一種纖溶活性蛋白。通過(guò)30％70％的硫酸銨梯度沉淀、Sephacryl$200HR分子篩、DEAESepharoseFF離子柱和BenzamidineSepharose6B親和純化，最后分離出了地鱉蟲(chóng)體內(nèi)含量最大的一種纖溶活性蛋白，該蛋白被命名為ESTL。最終的純