10391.海南捕鳥蛛毒素ⅲ與鈉通道亞型nav1.7選擇性相互作用位點(diǎn)的鑒定

1、I!Y11111311111211111171111112111114111113111181LIilllY3272438⑨潮南鉀軾夫尊碩士學(xué)位論文海南捕鳥蛛毒素III與鈉通道亞型Navl7選擇性相互作用位點(diǎn)的鑒定。學(xué)科專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)位類型。函科學(xué)學(xué)位口專業(yè)學(xué)位。研究生姓名李嘉妍導(dǎo)師姓名、職稱劉中華教授梁宋平教授論文編號(hào)湖南師范大學(xué)學(xué)位評(píng)定委員會(huì)辦公室二零一四年四月摘要海南毒素一III(HNTXIII)是由海南捕鳥蛛粗毒中分

2、離出來，分子量為3607Da，含有6個(gè)半胱氨酸，3對(duì)二硫鍵的抑制性胱氨酸結(jié)結(jié)構(gòu)模體(ICKMotif)的多肽神經(jīng)毒素。HNTX—III選擇性作用于電壓門控鈉通道，對(duì)Navl7的親和力最強(qiáng)，半抑制濃度IC50為180nM，其次是Navl2和Navl3，IC50分別是235nM、500nM。研究表明，HNTXIII是一個(gè)位點(diǎn)4毒素，與Navl7在通道的關(guān)閉狀態(tài)結(jié)合。Navl7主要存在于外周神經(jīng)系統(tǒng)，參與了可興奮細(xì)胞的動(dòng)作電位的起始和傳遞，研

3、究發(fā)現(xiàn)Navl7參與了疼痛的信號(hào)傳導(dǎo)，因此Navl7成為鎮(zhèn)痛藥物研發(fā)的新型靶點(diǎn)。為了找到更高專一性的Navl7抑制劑，基于HNTX—III作了分子設(shè)計(jì)，構(gòu)建了一系列HNTXIII突變體。同時(shí)根據(jù)經(jīng)典的Doublecycle研究方式，我們?cè)O(shè)計(jì)了一系列Navl7的突變體，通過毒素突變體與通道突變體的相互作用結(jié)果，我們成功鑒定了HNTXIII與Nayl7上的點(diǎn)對(duì)點(diǎn)結(jié)合方式。結(jié)果表明，Navl7上的酸性氨基酸殘基E818，D890，D891與H

4、NTX—III上的堿性氨基酸殘基K3，K25，H26，K30通過強(qiáng)烈的靜電作用結(jié)合；Navl7上的疏水性氨基酸殘基L823，V824，F(xiàn)826與HNTXIII上的疏水性氨基酸殘基F5，W28形成緊密的疏水核心；而DoubleCycle結(jié)果顯示：V1408僅與V31存在直接相互作用；V1410和D1411與V31，Y32，L33之間都存在直接相互作用；HNTX—III上N19，Y20，S24做了丙氨酸突變掃描后，可能由于氫鍵的改變使得其與