SARS相關冠狀病毒PPA-ELISA和nest-PCR檢測方法的建立及聯(lián)合應用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、重癥急性呼吸綜合癥(Severe Acute Respiratory Syndrome,SARS)的病原是SARS冠狀病毒(SARS.CoV),為了調(diào)查野生動物和家畜家禽體內(nèi)攜帶的冠狀病毒的情況以及其與SARS.CoV的基因序列同源性,本研究根據(jù)SPA能與多種動物血清IgG結合的特性,建立了間接PPA-ELISA檢測多種動物血清中SARS病毒相關抗體的方法;根據(jù)SARS冠狀病毒聚合酶基因序列設計引物,建立套式PCR(nest-PCR)檢

2、測方法.對11種動物146個樣品進行RT-PCR檢測,并用PCR產(chǎn)物測序.與Genbank中的SARS相關冠狀病毒的聚合酶基因進行序列比較,構建系統(tǒng)發(fā)育樹,分析不同宿主來源動物冠狀病毒與SARS冠狀病毒的同源性.兩種檢測方法的實驗結果表明:SPA與多種哺乳動物血清中的IgG有較好的結合能力,本實驗確定了PPA-ELISA的抗原-抗體最佳反應時間,HRP-SPA與抗體反應最佳時間及底物溶液的顯色時間,在此基礎上,建立了間接PPA-ELIS

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