sarscovs1基因的巴斯德畢赤酵母表達及阻斷多肽的研究

1、華中農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文SARSCoVS1基因的巴斯德畢赤酵母表達及阻斷多肽的研究姓名：盧海松申請學位級別：碩士專業(yè)：預防獸醫(yī)指導教師：郭愛珍20060601SARSCoVSl基因的巴斯德畢赤酵母表達及阻斷多肽的研究摘要嚴重急性呼吸道綜合征(severeacuterespiratorysyndrome，SARS)又稱“非典型性肺炎”，或“非典”，主要表現(xiàn)為肺炎及漸進性呼吸衰竭，死亡率為10％左右。它于2002年11月在中國廣東省首先爆發(fā)

2、，然后迅疾傳播至全球32個國家及地區(qū)，其病原為一種新的冠狀病毒(SARSassociatedcoronavirus，SARSCoV)。目前尚無特效藥物用于SARS治療，正在研究的各種抗病毒方法包括：用模擬受體分子或病毒的受體結(jié)合蛋白封閉病毒受體相互作用、用小肽分子抑制病毒與細胞膜間的融合、用特定中和表位研制亞單位疫苗等。SARSCoV刺突蛋白sl是與病毒主要受體血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(angiotensinconvertingenzyme2

3、。ACE2)相結(jié)合的病毒蛋白，其受體結(jié)合功能區(qū)包括在第318，510個氮基酸殘基間的193個氨基酸片段內(nèi)，該片段同時包含多個中和表位。本研究通過克隆表達SARSCoV的S1蛋白受體結(jié)合區(qū)，用表達的sl蛋白為靶蛋白，從噬菌體展示隨機肽庫中篩選特異性結(jié)合多肽，篩選阻斷多肽。為進一步研究病毒致病機理及抗病毒藥物奠定了基礎(chǔ)。本研究通過對Sl基因修飾，在編碼氨基酸不發(fā)生改變的前提下設(shè)計多對引物采用OverLapPCR對含有受體結(jié)合區(qū)的S1基因(7

4、771683，10411050，1236一1248，13171335，15901605)位存在的多個AT重復序列進行核苷酸置換。修飾后的sl基因克隆于酵母表達載體pPIC9K中，誘導上清經(jīng)過SDSPAGE和WesternBlot檢測，證實Sl蛋白在巴斯德畢赤酵母中獲得了表達。紫外分光光度計測定Sl蛋白在酵母表達產(chǎn)量為69mg／L，說明巴斯德畢赤酵母是一種適合s1蛋白表達的系統(tǒng)。表達的sl蛋白作為診斷抗原檢測入的陽性血清，ELISA結(jié)果證