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1、從貴州省平壩、青巖分別采集病牛水泡皮材料，通過BHK-21細(xì)胞培養(yǎng)、動物感染試驗，反向間接血凝試驗(RIHA)、RT-PCR檢測及PCR產(chǎn)物的基因測序，結(jié)果證實分離到兩株牛源O型口蹄疫病毒，分別命名為PB株和QY株。在本研究中，比較了四種不同提取病毒RNA的方法，結(jié)果表明，Trizol法簡單、快捷。通過Trizol法萃取病毒RNA，經(jīng)RT-PCR，從乳鼠胴體毒、FMD滅活疫苗毒及2份臨床病料中擴增出與預(yù)期設(shè)計相符的片段；另外，通過基因測
2、序結(jié)果與不同參考毒株相應(yīng)核苷酸序列進行同源性比較，QY、CS、SD株與HK、CHA99株同源性達86％以上，而與另外兩株O型參考毒株O1K、ITA的同源性較低，僅為79.7％-83.4％，而與A、C、AsiaⅠ、南非三型(SATⅠ、SATⅡ、SATⅢ)同源性都比較低，結(jié)果表明，QY、CS、SD屬于同一基因型；此外，根據(jù)不同拓樸型FMDV核苷酸同源性分析，三株分離毒屬于中東南亞型(ME-SA)。以上實驗結(jié)果有助于貴州省口蹄疫疫苗毒株的篩選
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