17056.米毛盤菌ym218胞外多糖深層發(fā)酵及抗腫瘤活性研究

1、獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名：墨2基趣時間：伽l乙年6月秀昌關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人完全了解安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，

2、即：學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。(保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議)研究生簽名：盈2星時間：vlL年細(xì)多日第一導(dǎo)師簽名：差妣摘要真菌胞外多糖是真菌在細(xì)胞內(nèi)合成后分泌到胞外的一類多糖，科學(xué)實驗表明，真菌胞外多糖具有很強烈的抗腫瘤活性，對癌細(xì)胞有很強的抑制力。由于胞外多糖具有產(chǎn)生

3、量大、易于與菌體分離等特點，因而可通過深層發(fā)酵實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。本文對LachnumspYM218胞外多糖的發(fā)酵條件及提取工藝進(jìn)行了研究，并初步探索了該多糖的抗腫瘤生物活性。以獲取較高胞外多糖產(chǎn)量為目的，通過正交試驗，確定液體發(fā)酵最佳培養(yǎng)基組成為：葡萄糖30g／L、酵母膏125g／L、Ca(OH)2005g／L。最佳液體培養(yǎng)條件為：起始pH值65、培養(yǎng)溫度28。C、搖床轉(zhuǎn)速210r／min。在該培養(yǎng)條件下，YM218’胞外多糖發(fā)酵周期由1

4、2d縮短為10d；胞外多糖最高產(chǎn)量由優(yōu)化前的4247g／L提高到99117g／L，相對于優(yōu)化前提高了13351％。在搖瓶發(fā)酵的基礎(chǔ)上，利用5L發(fā)酵罐進(jìn)行深層發(fā)酵試驗，確定5L發(fā)酵罐的最優(yōu)發(fā)酵條件為：裝液系數(shù)為O5，接種量10％，轉(zhuǎn)速230r／min，通氣量3L／min。在此培養(yǎng)條件下，胞外多糖的最高產(chǎn)量由優(yōu)化前11756g／L提高到13358g／L，比優(yōu)化前提高了1363％。以獲取較高的胞外多糖活性為目的，確定YM218胞外多糖的最佳提

5、工藝為：將離心去除菌絲體的發(fā)酵液調(diào)至中性(pH=7)，離心去除沉淀，55℃下濃縮至原體積的1／4，冷卻后加入無水乙醇溶液至終濃度75％，4。C靜置24h，5000r／min離心15min，收集沉淀，沉淀經(jīng)無水乙醇，乙醚，丙酮反復(fù)洗滌后，低溫真空干燥，得胞外粗多糖。通過濺定YM218胞外多糖抗腫瘤活性來研究其生物活性，研究結(jié)果表明：50％醇沉粗多糖的抗腫瘤活性最好，且抑制作用具有劑量依賴性，濃度為O4mg／mL時，對Hep一2細(xì)胞增殖的抑