14299.豬體細(xì)胞轉(zhuǎn)入凝血細(xì)胞因子ⅸ和hfat1基因的研究

1、分類號(hào)——UDC學(xué)校代碼10126論文題目密級(jí)——編號(hào)——豬體細(xì)胞轉(zhuǎn)人凝血因子Ⅸ和hfat一1基因的研究THETRANSGENICRESEARCHESONPORCINESON【ATICCELLSⅥⅡTHmMANCOAGULATIONFACTORIXANDHFAT—lGENES研究生：指導(dǎo)教師：專業(yè)：研究方向：韓雪潔李榮鳳研究員李雪玲教授動(dòng)物學(xué)生殖生物學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院：生命科學(xué)學(xué)院二零一三年五月一苓一二平丑月韓雪潔豬體細(xì)胞轉(zhuǎn)人凝血因子Ⅸ和

2、hfat一1基因的研究豬體細(xì)胞轉(zhuǎn)人凝血因子|X和hfat一1基因的研究摘要豬在解剖學(xué)，神經(jīng)生物學(xué)、心臟血管、胃腸道和基因組方面與人相似，因此在研究人類疾病時(shí)，豬被認(rèn)為是更好的動(dòng)物模型，還可作為異種器官移植的供體。由于異種器官移植的深入研究，又將轉(zhuǎn)基因豬的研究推向一個(gè)新的高峰。本研究構(gòu)建兩種表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)染細(xì)胞，獲得轉(zhuǎn)基因細(xì)胞，為生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因克隆豬做準(zhǔn)備。1、人凝血因子Ⅸ基因和hfat1基因表達(dá)載體的構(gòu)建(1)從人胎兒肝臟中提取對(duì)峨并擴(kuò)增出

3、入凝血因子Ⅸ(humancoagI；llationfactorⅨ，11FⅨ)cDNA序列，同時(shí)，PCR擴(kuò)增出牛生長(zhǎng)激素(BGH)polyA序列，將hFⅨ的cDNA序列與BGHpolyA序列分別連接到表達(dá)載體pbCSN2一RC的牛酪蛋白(CSN2)啟動(dòng)子之后，構(gòu)建帶有新霉素抗性和紅色熒光蛋白雙篩選標(biāo)記的乳腺特異性表達(dá)載體pbCSN2一hFⅨ一pAI匯。(2)改造pCAGDNA3，在砌I后面，CAGG啟動(dòng)子前端添加覷I、BgI和艫I三個(gè)酶切