丹參對凍融小鼠卵巢組織移植早期促進(jìn)卵泡發(fā)育和血管生成作用的研究.pdf

1、目的：
　　 探討丹參對凍融小鼠卵巢組織移植早期促進(jìn)卵泡發(fā)育和血管生成作用的研究。
　　 方法：
　　 實(shí)驗(yàn)一:收集C57BL/6j雌鼠和BALB/c雄鼠雜交后的F1代第一天(d1)小鼠卵巢慢凍速融后移植至8～12周齡的雄鼠腎臟被膜下,移植后小鼠按給藥不同分為生理鹽水組和低(0.4ml/kg)、中(4ml/kg)、高(40ml/kg)劑量丹參干預(yù)組,分別于移植后第二天(2d)、第七天(7d)和第十四天(14d)回

2、收卵巢移植物。光鏡和電鏡技術(shù)觀察卵巢組織凍融前后和移植前后的組織形態(tài)學(xué)改變、計(jì)數(shù)卵泡數(shù)量、免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測細(xì)胞凋亡、血管內(nèi)皮生長因子(Vascular Endothelial GrowthFactor,VEGF)的表達(dá)和計(jì)數(shù)微血管密度。
　　 實(shí)驗(yàn)二:收集C57BL/6j雌鼠和BALB/c雄鼠雜交的F1代4周齡小鼠卵巢,慢凍速融后移植至F1代8～12周齡的雄鼠腎臟被膜下,移植后小鼠按給藥不同分為丹參組(4ml/kg)和生理鹽

3、水組,分別于移植后1d(24h),2d(48h)和7d回收卵巢移植物,將凍融以及移植后不同時(shí)間段的卵巢組織HE染色后行卵泡計(jì)數(shù)、免疫組織化學(xué)分析及RT-PCR法檢測血管相關(guān)基因VEGF的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 實(shí)驗(yàn)一:
　　 1、小鼠卵巢經(jīng)凍融后原始卵泡的存活率為88.8％。
　　 2、光、電鏡觀察卵巢組織移植后7d卵泡細(xì)胞和顆粒細(xì)胞結(jié)構(gòu)欠完整,移植后14d卵泡結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常。
　　 3、移植后

4、14d丹參組各級卵泡數(shù)及卵泡存活率多于生理鹽水組(12.7％),尤以高、中劑量丹參組(31.2％、24.2％)差異顯著(P<0.05)；移植后VEGF蛋白表達(dá)呈上升趨勢,至14d仍維持較高水平,尤以高、中劑量丹參組差異顯著(P<0.05)；移植卵巢組織后各時(shí)間段細(xì)胞凋亡指數(shù)逐漸下降,移植后14d高、中劑量丹參組細(xì)胞凋亡指數(shù)最低(2.53±0.03％、3.25±0.02％)。
　　 實(shí)驗(yàn)二:
　　 1、移植卵巢組織各時(shí)間段

5、丹參組的卵巢卵泡計(jì)數(shù)及卵泡存活率均高于生理鹽水對照組,P<0.05。
　　 2、移植小鼠卵巢組織血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)蛋白的表達(dá)有上升趨勢,第7d達(dá)最高峰,兩組之間無顯著性差異,P>0.05。
　　 3、移植卵巢組織各時(shí)間段丹參組的細(xì)胞凋亡指數(shù)均低于生理鹽水對照組,P<0.05。
　　 4、移植后48h VEGF164 mRNA和VEGF188 mRNA的表達(dá)量增加,且丹參組高于對照組,兩組之間有顯著性差異

6、,P<0.05；而兩組之間VEGF120 mRNA的表達(dá)無明顯變化,P>0.05。
　　 結(jié)論：
　　 1、結(jié)合光鏡和電鏡觀察能更全面地評價(jià)凍融過程和移植過程對小鼠卵巢組織的影響。常規(guī)慢凍.速融方法能較好保存小鼠卵巢組織原始卵泡的形態(tài)結(jié)構(gòu)。移植早期的缺血缺氧對小鼠卵巢組織造成了遠(yuǎn)比凍融過程更嚴(yán)重的損傷,其主要發(fā)生在移植后一周內(nèi)。
　　 2、凍融小鼠卵巢組織移植后原始卵泡能存活并生長發(fā)育成竇卵泡。
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