他可莫司滴眼液治療角膜堿燒傷的免疫學(xué)機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究他可莫司(FK506)滴眼液治療大鼠角膜堿燒傷的藥物有效濃度及給藥方案,評(píng)價(jià)其抑制角膜堿燒傷后免疫炎癥反應(yīng),改善角膜微環(huán)境的效能,并探討其作用機(jī)制。
　　 方法:NaOH濾紙片敷貼法制作大鼠角膜中度堿燒傷模型,96只wistar大鼠隨機(jī)分為A、B、C、D四組,A、B、C組為治療組,給予濃度0.05％、0.1％、0.5％FK506滴眼液治療,4次/天,D組為陰性對(duì)照組。觀察不同組別大鼠角膜透明性、基質(zhì)融解程度以及新生血管

2、形成情況。在不同時(shí)間點(diǎn)(第3,7,14,30d)處死大鼠取下角膜,HE染色分析角膜組織結(jié)構(gòu)的變化,比較炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度的差異,免疫熒光法檢測(cè)CD4/CD8陽(yáng)性T細(xì)胞時(shí)空表達(dá)規(guī)律。
　　 結(jié)果:堿液濾紙片燒傷角膜后,角膜霧狀水腫,燒傷區(qū)角膜上皮缺失,基質(zhì)融解形成潰瘍,角膜緣血管擴(kuò)張,后期形成新生血管,角膜失去透明性。FK506治療組的角膜在潰瘍形成面積,角膜混濁等級(jí)以角膜新生血管化程度方面均明顯好于對(duì)照組。①.角膜融解定量分析結(jié)果

3、:燒傷后3d,A、B、C組角膜融解面積分別為(3.14±0.25)mm2、(2.65±0.28)mm2、(2.27±0.47)mm2,而對(duì)照組D組為(4.06±0.41)mm2,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),低濃度FK506治療組與中、高濃度組相比亦存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),而0.1％與0.5％濃度組之間則無(wú)明顯差別(P>0.05)；7d時(shí)角膜融解面積縮小,分別為A組(1.82±0.51)mm2、B組(1.34±0.41)mm

4、2、C組(0.90±0.39)mm2,與對(duì)照組D組(2.47±0.54)mm2,相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。②.角膜混濁定量分析結(jié)果:治療組在燒傷后角膜混濁評(píng)分低于對(duì)照組(P<0.05),其規(guī)律與角膜融解面積的變化曲線相一致,中高濃度組之間則無(wú)差異。③.角膜新生血管定量分析結(jié)果:治療組在燒傷后3d角膜新生血管面積分別為A組(4.26±0.36)mm2、B組(3.88±0.33)mm2、C組(3.54±0.46)mm2均小于對(duì)照

5、組D組(5.00±0.12)mm2,差異有顯著意義(P<0.01),A與B、C比較也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而B與C比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；此種差異性保持至第14d方逐漸減小。燒傷角膜HE染色檢查顯示FK506治療組基質(zhì)中炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)的數(shù)量明顯少于對(duì)照組,計(jì)數(shù)結(jié)果顯示3d時(shí),A組(77.67±4.51)個(gè)/0.04mm2、B組(51.33±3.21)個(gè)/0.04mm2、C組(41.67±3.06)個(gè)/0.04mm2,而同

6、期對(duì)照組D組(97.00±6.25)個(gè)/0.04mm2,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。免疫熒光提示治療組中CD4陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量少于對(duì)照組,通過(guò)光密度分析,低濃度治療組為中等強(qiáng)度熒光,中高濃度治療組為低熒光,而對(duì)照組則表現(xiàn)為彌漫性強(qiáng)熒光。在整個(gè)角膜堿燒傷病理過(guò)程中,CD8+T淋巴細(xì)胞的表達(dá)情況,給藥組與對(duì)照組對(duì)比未見(jiàn)明顯差異。
　　 結(jié)論:他可莫司(FK506)局部使用可明顯下調(diào)角膜堿燒傷后T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的特異性免疫反應(yīng),同