傳染性法氏囊病強弱毒感染誘導B淋巴細胞凋亡差異的研究.pdf

1、傳染性法氏囊?。╥nfectious bursal disease, IBD）是由傳染性法氏囊病病毒（infectious bursal disease virus, IBDV）引起的雛雞的一種急性、高度接觸性、致死性傳染病。傳染性法氏囊病病毒(IBDV)以雞的免疫系統(tǒng)為靶器官，造成其免疫抑制。IBDV有血清I型和II型，僅血清I型對雞致病。血清I型病毒由于發(fā)生過兩次大的變異，到目前為止出現(xiàn)了三種毒株：經(jīng)典毒、變異株和超強毒株。目前，國

2、內(nèi)外針對IBDV基因功能及侵染機制的研究主要還是利用細胞適應(yīng)株或經(jīng)典株，針對超強毒株的研究還是相對較少。超強毒株與弱毒株在致病機制上的差異值得深入研究。
　　本研究選用IBDV超強毒Gx株、弱毒Gt株作為試驗毒株，就它們對SPF雞的致病特性進行了研究，以期在臨床致病特性、組織器官病理變化以及感染后靶細胞凋亡和壞死情況等方面尋找差異。結(jié)果表明，vvIBDV具有較高的致死率，與弱毒相比vvIBDV能引起感染雞靶細胞快速凋亡壞死，引起法

3、氏囊組織發(fā)生嚴重的病理變化，導致感染雞免疫系統(tǒng)的嚴重損傷。導致雞的急性死亡。
　　為了降低法氏囊B淋巴細胞體外培養(yǎng)的凋亡速度，更好地研究IBDV強弱毒侵染B淋巴細胞的情況。本研究設(shè)計分泌表達雞源CD154分子的功能區(qū)。根據(jù)GenBank中雞CD154的參考序列克隆其編碼區(qū)。通過融合PCR將CD154的C端與小鼠CD8α蛋白的N端串聯(lián)，并連接信號肽以利于分泌表達。結(jié)果顯示，融合蛋白成功表達，表達量隨時間的延長而增加，并且能夠成功分泌

4、到細胞外。雞CD154分子功能區(qū)的成功表達，為更好地在體外研究IBDV感染B淋巴細胞提供了很好的基礎(chǔ)。
　　在前兩部分內(nèi)容的基礎(chǔ)上，本研究利用IBDV強弱毒分別感染體外培養(yǎng)的雞原代B淋巴細胞，通過利用測定IBDV強弱毒感染B淋巴細胞后不同時間點的TCID50和ELD50以及通過熒光定量PCR等方式比較IBDV強弱毒在B淋巴細胞上復制特性，來進一步研究IBDV強弱毒致病性差異的機制。結(jié)果顯示，vvIBDV能夠在其B淋巴細胞上快速復制