正常豬外周血淋巴細(xì)胞cDNA文庫(kù)的構(gòu)建和EST的初步分析.pdf

1、淋巴細(xì)胞是具有特異性免疫功能的免疫活性細(xì)胞，它們?cè)诿庖邞?yīng)答過程中起著核心作用，是構(gòu)成機(jī)體防御系統(tǒng)的重要組成部分。 本研究用經(jīng)典文庫(kù)構(gòu)建技術(shù)，構(gòu)建了正常豬外周血淋巴細(xì)胞cDNA文庫(kù)，得到了庫(kù)容量為1.2×106pfu/ml、重組率為94﹪、85﹪的插入片段處于750bp～2000之間的高質(zhì)量文庫(kù)。隨機(jī)測(cè)定了1100條ESTs，經(jīng)拼接和聚類，得到了152條高表達(dá)基因Contigs和619條低表達(dá)基因Singletons。其中高表達(dá)基

2、因主要包括：血色素α亞基、rRNA核酸內(nèi)切酶、衰老相關(guān)蛋白、促進(jìn)增殖基因21、細(xì)胞色素氧化酶Ⅲ和血色素β亞基。經(jīng)序列比對(duì)后發(fā)現(xiàn)，有23﹪的ESTs為與任何物種都沒有匹配的新基因，有75.9﹪的ESTs為與豬沒有匹配的豬的新基因，說明了大部分的豬外周血淋巴細(xì)胞的基因還沒有被分離和鑒定出來。經(jīng)GO進(jìn)行功能基因的分類和KEGG進(jìn)行路徑圖的繪制，初步繪制了正常豬外周血淋巴細(xì)胞的基因表達(dá)譜。推測(cè)碳水化合物代謝、能量代謝、脂肪代謝、核苷代謝、氨基酸

3、代謝及輔因子和維生素代謝為豬外周血淋巴細(xì)胞主要的基礎(chǔ)代謝。細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)路徑中MAPK信號(hào)通路、鈣信號(hào)通路、胰島素信號(hào)通路、脂肪細(xì)胞因子信號(hào)通路、免疫系統(tǒng)中的Toll樣受體信號(hào)通路、B細(xì)胞受體信號(hào)通路和T細(xì)胞受體信號(hào)通路在實(shí)現(xiàn)豬外周血淋巴細(xì)胞功能方面至關(guān)重要。 本研究構(gòu)建了高質(zhì)量的豬外周血淋巴細(xì)胞cDNA文庫(kù)，并繪制了正常豬外周血淋巴細(xì)胞基因表達(dá)譜，為研究免疫相關(guān)基因提供了平臺(tái)，為下一步做芯片雜交，進(jìn)一步揭示病毒感染的致病機(jī)理奠定