腺病毒介導(dǎo)HBx轉(zhuǎn)染正常人外周血淋巴細(xì)胞的研究.pdf

1、目的:體外環(huán)境下，攜帶HBx的重組腺病毒轉(zhuǎn)染正常人外周血淋巴細(xì)胞，探究人淋巴細(xì)胞內(nèi)HBx的復(fù)制與擴(kuò)增情況，及HBx對(duì)IL-10表達(dá)水平和人淋巴細(xì)胞凋亡的影響。
　　方法:淋巴細(xì)胞取自正常人外周血，用攜帶HBx的重組腺病毒Ad-HBx轉(zhuǎn)染淋巴細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)組。用攜帶有增強(qiáng)型綠色熒光蛋白的重組腺病毒Ad-EGFP轉(zhuǎn)染淋巴細(xì)胞和未轉(zhuǎn)染腺病毒的淋巴細(xì)胞作為本實(shí)驗(yàn)的陰性和空白對(duì)照組。3組分別標(biāo)記為Ad-HBx/Lymphocyte組，Ad-E

2、GFP/Lymphocyte組和Lymphocyte組。相同條件下，將3組細(xì)胞分別進(jìn)行培養(yǎng)48h后，采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(Q-PCR)定量檢測(cè)人外周血淋巴細(xì)胞內(nèi)HBx基因的復(fù)制與擴(kuò)增的情況。將3組細(xì)胞分別培養(yǎng)至12h，24h，36h，48h后用Elisa法檢測(cè)IL-10的表達(dá)水平。采用GuavaNexinReagent流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)攜帶HBx的重組腺病毒轉(zhuǎn)染人外周血淋巴細(xì)胞72h后對(duì)淋巴細(xì)胞凋亡效應(yīng)的影響。
　　結(jié)果:體外條件

3、下，腺病毒介導(dǎo)HBx轉(zhuǎn)染正常人外周血淋巴細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組中Ad-HBx轉(zhuǎn)染48h后淋巴細(xì)胞內(nèi)HBx基因的Q-PCR定量測(cè)定結(jié)果較Ad-EGFP/Lymphocyte組和Lymphocyte空白對(duì)照組明顯增高，且此差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Elisa法顯示實(shí)驗(yàn)組中Ad-HBx轉(zhuǎn)染24h，36h和48h后IL-10的表達(dá)水平明顯低于Ad-EGFP/Lymphocyte組和Lymphocyte空白對(duì)照組，且此差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.

4、05）。Guava Nexin Reagent流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)3組人淋巴細(xì)胞的凋亡情況，實(shí)驗(yàn)組Ad-HBx/Lymphocyte組早期凋亡細(xì)胞明顯多于其余2組，且此差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論:體外環(huán)境下，通過重組腺病毒轉(zhuǎn)染至正常人外周血淋巴細(xì)胞中的HBx能夠在細(xì)胞內(nèi)實(shí)現(xiàn)基因的復(fù)制與擴(kuò)增，能夠?qū)θ肆馨图?xì)胞中IL-10的分泌產(chǎn)生明顯的抑制作用，同時(shí)對(duì)人淋巴細(xì)胞早期凋亡效應(yīng)具有明顯的促進(jìn)作用。HBx在人淋巴細(xì)胞內(nèi)的