生殖器念珠菌病都柏林念珠菌的分離與PCR-RAPD方法鑒定.pdf

1、目的：通過(guò)芽管試驗(yàn)、厚壁孢子試驗(yàn)、CHROM顯色試驗(yàn)、42℃溫度試驗(yàn)、API20CAUX糖同化試驗(yàn)等表型方法結(jié)合RAPD(隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA)方法分離和鑒定都柏林念珠菌。建立一種簡(jiǎn)單、可靠、快速的基因型鑒定方法，調(diào)查本院區(qū)性病門(mén)診生殖器念珠菌病患者都柏林念珠菌的陽(yáng)性率。 方法：收集了2002年10月～2006年3月期間到天津市性傳播疾病研究所門(mén)診就診的生殖器念珠菌病患者的700例臨床菌株和北京大學(xué)真菌和真菌病研究中心饋贈(zèng)的白念

2、珠菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC-11006、都柏林念珠菌標(biāo)準(zhǔn)菌株CBS-8501作為樣本，所有臨床菌株均經(jīng)過(guò)芽管試驗(yàn)、厚壁孢子試驗(yàn)、CHROM顯色試驗(yàn)鑒定為白念珠菌，然后將上述菌株進(jìn)行42℃溫度試驗(yàn)和API20CAUX試驗(yàn)。溫度試驗(yàn)作為初篩試驗(yàn)篩選出108株陽(yáng)性菌株。然后，將42℃溫度試驗(yàn)中生長(zhǎng)不良或完全不生長(zhǎng)的原菌株在沙氏培養(yǎng)基活化兩遍，每次活化24h～48h。用含有蛋白酶K的裂解液裂解菌細(xì)胞，采用傳統(tǒng)的酚氯仿抽提，異丙醇沉淀法制備DNA模板。

3、通過(guò)RAPD的方法對(duì)基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增，2％的瓊脂糖凝膠電泳紫外線(xiàn)燈下觀(guān)察帶型。 結(jié)果：經(jīng)過(guò)三遍溫度試驗(yàn)后，108例臨床菌株和1例都柏林念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株幾乎無(wú)生長(zhǎng)。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行2％的瓊脂糖凝膠電泳，顯示兩種截然不同的帶型，可以清楚的區(qū)分開(kāi)白念珠菌和都柏林念珠菌。但未在臨床標(biāo)本中篩選出都柏林念珠菌。 結(jié)論： 1.生殖器念珠菌病的白念珠菌中，15.4％的菌株在42℃溫度試驗(yàn)幾乎無(wú)生長(zhǎng)或生長(zhǎng)較差。 2.厚壁