下丘腦室旁核內(nèi)COX-2表達(dá)及心肌細(xì)胞凋亡與心衰相關(guān)性研究.pdf

1、目的：近年來，慢性心力衰竭(CHF)的發(fā)病率和死亡率明顯地上升，慢性心力衰竭已經(jīng)成為當(dāng)今社會重要的公共衛(wèi)生問題。隨著心力衰竭發(fā)病機(jī)制研究的深入，認(rèn)為心衰主要涉及神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞因子系統(tǒng)的激活和心室重構(gòu)。近來的研究發(fā)現(xiàn)，下丘腦室旁核(PVN)內(nèi)炎癥因子環(huán)氧合酶-2(COX-2)參與了慢性心力衰竭的過程，但其作用機(jī)制還不是十分清楚。也有研究發(fā)現(xiàn)，心肌細(xì)胞凋亡參與了慢性心力衰竭的病理生理過程，是心力衰竭發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制。本試驗(yàn)旨在研究心衰大鼠

2、下丘腦室旁核內(nèi)COX-2的表達(dá)水平及心肌細(xì)胞凋亡情況，探討中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥因子COX-2與心肌細(xì)胞凋亡在心衰發(fā)病中的機(jī)制及兩者相互關(guān)系；觀察NF-κB抑制劑吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(PDTC)和鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑依普利酮(EPL)對心衰大鼠室旁核COX-2的表達(dá)及心肌細(xì)胞凋亡的影響，探討心力衰竭治療的新方法。
　　 方法：SD大鼠隨機(jī)分為手術(shù)組和假手術(shù)組(n=10)，手術(shù)組再分為心衰未治療組(n=20)，PDTC治療組(n=20

3、)和EPL治療組(n=20)。手術(shù)組結(jié)扎冠脈左前降支誘導(dǎo)急性心肌梗死心衰，假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎作為對照。飲水中分別給予PDTC(150 mg/kg/d)、EPL(30 mg/kg/d)和生理鹽水。六周后，血流動力學(xué)測定，留取心、腦標(biāo)本。心肌組織常規(guī)制作石蠟切片，HE染色觀察心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，TUNEL染色法觀察心肌細(xì)胞凋亡情況。腦組織冰凍切片免疫熒光染色檢測PVN內(nèi)COX-2的表達(dá)。腦組織勻漿，提取胞漿蛋白，用Western Blot

4、檢測COX-2蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：⑴血流動力學(xué)測定結(jié)果示：心衰組LVEDP明顯高于假手術(shù)組大鼠(P<0.05)；EPL組LVEDP較心衰組明顯減低(P<0.05)；PDTC組LVEDP較心衰組略減低(P>0.05)，但差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與假手術(shù)組大鼠相比心衰組大鼠±dp/dt max均明顯降低(P<0.05)；EPL組±dp/dt max較心衰組明顯升高(P<0.05)；PDTC組±dp/dt max較心衰組有所升高(P>0

5、.05)，但差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑵心肌病理改變：光鏡下，心衰組心肌損傷程度與假手術(shù)組相比明顯加重。心衰大鼠心肌細(xì)胞不均勻肥大、伸長，心肌纖維粗細(xì)不等，間隙增寬，細(xì)胞核大小不一，部分心肌細(xì)胞核消失。⑶免疫熒光檢測PVN內(nèi)COX-2的表達(dá)：心衰組室旁核內(nèi)免疫熒光較假手術(shù)組明顯增強(qiáng)。EPL組和PDTC組免疫熒光強(qiáng)度基本介于心衰組與假手術(shù)組之間。⑷Western blot測定各組大鼠PVN中COX-2表達(dá)情況：心衰組COX-2表達(dá)(0.82±0.

6、10)明顯高于假手術(shù)組(0.35±0.09)(P<0.05)；EPL組大鼠PVN內(nèi)COX-2表達(dá)(0.52±0.20)明顯低于心衰組(P<0.05)，PDTC組PVN內(nèi)COX-2表達(dá)(0.71±0.10)比心衰組減低(P<0.05)。⑸原位末端標(biāo)記法檢測大鼠心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)結(jié)果示：心衰組心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)(36.82±6.34)明顯高于假手術(shù)組(9.68±8.40)(P<0.05)；EPL組心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)(24.21±6.44)明顯低于

7、心衰組(P<0.05)；PDTC組心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)(33.24±5.92)低于心衰組(P<0.05)；并且心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)與PVN中COX-2表達(dá)與有顯著相關(guān)性(r=0.98，P<0.05)。
　　 結(jié)論：①心衰大鼠下丘腦室旁核內(nèi)COX-2表達(dá)明顯升高，COX-2的確參與了心衰的發(fā)生發(fā)展。EPL可明顯降低PVN內(nèi)COX-2的產(chǎn)生，改善心衰大鼠的心臟功能，抑制心衰的發(fā)生發(fā)展，PDTC可在一定程度上降低COX-2蛋白含量，但并不明顯